[发明专利]一种蓝莓天然酵母Bob1及其筛选方法和应用

说明书

一种蓝莓天然酵母Bob1及其筛选方法和应用，属于微生物技术领域。本发明提供了一种蓝莓天然酵母Bob1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.23757。还提供了该蓝莓天然酵母Bob1的筛选方法和应用。本发明蓝莓天然酵母Bob1能够产生酒精，所酿造的蓝莓果酒酸甜适中，香气馥郁，品质优良，酒精度为3.2％，具有典型的蓝莓风味，酸甜可口，适宜饮用，为蓝莓酒提供一种蓝莓天然酵母株。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种蓝莓天然酵母Bob1及其筛选方法和应用。

背景技术

蓝莓因为其营养物质丰富，口感酸甜，外形小巧独特，主要作为新鲜水果食用。近年来，将蓝莓加工为果脯、果酱也同样深受广大人民的喜爱。但是由于蓝莓果皮较薄，没有坚硬果皮包裹，极不易储存。虽然蓝莓的优点有很多，但是由于每年蓝莓的上市时间集中，产量大，且蓝莓的贮运性很差，导致每年蓝莓由于无法及时食用完而造成了很大的浪费。这不仅使我国蓝莓果业的发展受影响严重，同时也造成了巨大的经济损失。要想很好地解决这个问题，传统的水果消费观念就必须被改变，而蓝莓酒正是蓝莓理想的消费转换方式之一。为避免果酒风味的同质化，生产独具特色的蓝莓果酒，筛选适合蓝莓果酒的天然酵母显得尤为重要。同时，由天然酵母发酵蓝莓可产生酒精。

发明内容

针对上述现有技术中存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种蓝莓天然酵母Bob1 及其筛选方法和应用。本发明蓝莓天然酵母Bob1能够产生酒精，所酿造的蓝莓果酒酸甜适中，香气馥郁，品质优良，酒精度为3.2％，pH为3.12，残糖量为13.06g/L，总酸为3.07g/L。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供了一种蓝莓天然酵母Bob1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC NO.23757，分类命名：Pichia bruneiensis，保藏日期为：2021 年11月8日，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

还提供了一种蓝莓天然酵母Bob1的筛选方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)取新鲜蓝莓无菌破碎处理后密闭，置于生化培养箱中培养，待有CO₂产生后，取发酵液用无菌水稀释，得到稀释液。蓝莓成熟饱满，每颗果实都经过认真筛选，清洗，但不能过度清洗。

(2)将上述步骤(1)得到的稀释液涂布于含有氯霉素的沙保罗下层培养基中，在通风条件下恒温培养后，置于沙保罗上层培养基中，在密闭环境中避光倒置培养1-3h；观察培养基颜色的变化，TTC试剂与酒精会发生颜色变化生成红色的化合物；TTC下层培养基中添加氯霉素，以抑制杂菌生长；避光倒置培养，以观察显色状况；产酒精能力强的菌株，在培养基上显出的颜色越深。同时，这一过程可初步筛选出优良、发酵性能较好的菌株。

(3)挑取显深红色的菌株，接种于酵母固体培养基上，在通风条件下恒温培养，选取具有典型酵母特征的单菌落，进行3-4次平板划线，保证尽量获得纯菌，得到单个菌落接种至酵母固体培养基中培养，稀释后接种至鉴别培养基上纯化培养，挑取纯菌株，并对纯菌株进行镜检。

(4)采用试剂盒提取法提取上述步骤(3)得到的纯菌株的基因组DNA，以ITS1和ITS4为引物，PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳检测，得到基因序列；以引物ITS1和ITS4扩增其26SrDNA 的D1/D2区域。

(5)进行生长性能分析和理化性质分析，筛选得到蓝莓天然酵母Bob1。

所述的筛选方法，其特征在于所述步骤(1)中培养的条件为：培养温度28-30℃，培养时间1-3d，所述发酵液与无菌水的稀释比例为1-2:1-2，优选1:1。保证部分果实表面暴露在空气中。