[发明专利]一种用于神经元丝状蛋白磁微粒化学发光免疫检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种用于神经元丝状蛋白磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括磁珠包被的AD7c-NTP单克隆抗体Ⅰ包被物、碱性磷酸酶标记的AD7c-NTP单克隆抗体Ⅱ结合物、校准品和校准品缓冲液。

2.根据权利要求1所述的用于神经元丝状蛋白磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠包被的AD7c-NTP单克隆抗体1包被物为表面包裹有AD7c-NTP单克隆抗体Ⅰ包被物的超顺磁性纳米材料，粒径为10～30nm。

3.根据权利要求1所述的用于神经元丝状蛋白磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记的AD7c-NTP单克隆抗体Ⅱ酶结合物为碱性磷酸酶和神经元丝状蛋白抗体的偶联物。

4.根据权利要求3所述的用于神经元丝状蛋白磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述神经元丝状蛋白抗体为小鼠单克隆抗体。

5.根据权利要求1所述的用于神经元丝状蛋白磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述校准品为人AD7C-NTP，终浓度为240ug/mL。使用时用生物样品稀释液稀释至4800pg/ml、2400pg/mL、1200pg/mL、600pg/mL、300pg/mL、150pg/mL六个梯度。

6.根据权利要求5所述的用于神经元丝状蛋白磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述校准品使用时用校准品稀释液稀释至4800pg/ml、2400pg/mL、1200pg/mL、600pg/mL、300pg/mL、150pg/mL六个梯度。

7.一种采用根据权利要求1～6任一项所述的用于神经元丝状蛋白磁微粒化学发光免疫检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

a.加样和孵育：将待测样本、校准品分别等体积加入反应管中，然后加入等体积的碱性磷酸酶标记的AD7c-NTP单克隆抗体Ⅱ酶结合物和磁珠包被的AD7c-NTP单克隆抗体Ⅰ包被物，孵育反应形成AD7c-NTP单克隆抗体Ⅱ-神经元丝状蛋白-AD7c-NTP单克隆抗体Ⅰ复合物；

b.磁分离清洗：将步骤a)中孵育完成的反应管放置在磁分离架上，静置后除去上清，加入磁珠包被物缓冲液清洗后再次将反应管放置在磁分离架上静置后除去上清，反复清洗；

c.发光检测：加入酶促发光底物液避光孵育，测量发光值；

d.计算含量：将待测样本的发光强度与校准品的标准曲线比对，使用四参数Logistic方程拟合可计算出待测样本中AD7c-NTP的含量。

8.根据权利要求7所述的用于神经元丝状蛋白磁微粒化学发光免疫检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述待测样本、校准品、碱性磷酸酶标记的AD7c-NTP单克隆抗体Ⅱ酶结合物和磁珠包被的AD7c-NTP单克隆抗体Ⅰ包被物均为等体积加入，加入体积为每种50μL。

9.根据权利要求7所述的用于神经元丝状蛋白磁微粒化学发光免疫检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述磁珠包被的AD7c-NTP单克隆抗体Ⅰ包被物采用如下步骤制备：将超顺磁微粒加入PBS缓冲液中，加入神经元丝状蛋白抗体，37℃反应18小时得到神经元丝状蛋白抗体的磁珠包被物。。

10.根据权利要求7所述的用于神经元丝状蛋白磁微粒化学发光免疫检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记的AD7c-NTP单克隆抗体Ⅱ酶结合物采用如下步骤制备：将碱性磷酸酶加入碳酸钠缓冲液中，加入神经元丝状蛋白抗体，37℃反应4小时后，用ProteinG亲和柱纯化酶标抗体，得到AD7c-NTP单克隆抗体Ⅱ酶结合物。