[发明专利]一种用于神经元丝状蛋白磁微粒化学发光免疫检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种用于神经元丝状蛋白磁微粒化学发光免疫检测试剂盒及其检测方法，其中，所述试剂盒包括磁珠包被的AD7c‑NTP单克隆抗体Ⅰ包被物、碱性磷酸酶标记的AD7c‑NTP单克隆抗体Ⅱ结合物、校准品和校准品缓冲液。本发明的神经元丝状蛋白含量试剂盒以磁微粒子作为免疫反应的固相，利用化学发光免疫分析方法与化学发光类测定仪配合，用于测定人体样本中的神经元丝状蛋白含量，避免了酶联免疫试剂盒存在的线性范围窄、操作繁琐等缺点，且解决了灵敏度低、稳定性差、成本高等缺陷，该试剂盒与目前专用于科研的ELISA试剂盒相比，检测范围宽，制备工艺简单价格低廉，灵敏度高，重复性好，线性宽，性能超过目前科研的ELISA试剂盒产品。

技术领域

本发明涉及一种用于神经元丝状蛋白磁微粒化学发光免疫检测试剂盒及其检测方法，属于分子免疫学领域。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是人在老年期最常见的中枢神经系统退行性疾病，是引起痴呆的最常见的病因。临床上表现为智力水平的慢性削弱及记忆的慢性丢失。据报道，随着全球人口的老龄化，AD发病率也与日俱增，到2050年将增至1.15～1.35亿。由于目前仍没有有效的治疗方法来预防、制止或逆转阿尔茨海默病；AD的唯一有效的治疗方法是延缓或减轻症状。因此，AD的早期诊断至关重要。

目前，尽管可以使用包括磁共振成像，PET和示踪剂在内的成像方法来帮助AD的早期诊断，但成本昂贵且需要高水平的检测人员，因此不能用作常规的早期检测方法。通过脑脊液检测Aβ和Tau蛋白也可以达到类似的目的，但是它是有创性的，不能广泛用于AD的早期筛查。因此，理想的生物标志物检测应具有指导明确，成本低，不易感染的优点。

AD7c-NTP是NTP家族中的一个成员，是由Suzanne M.de la Monte等首次从AD晚期患者的颞叶中分离出一个新的包含Alu序列cDNA，被命名为AD7c-NTP，其序列全长为1442bp，含有1125个核苷酸组成的ORF，可编码含375个氨基酸的成熟蛋白，分子质量约为41kD，等电点为9.89。已有文献公开了利用生物信息学方法发现AD7c-NTP基因定位于lp36.11的负链上，无内含子序列，编码产物可能存在3个跨膜区的相关内容。

1996年de la Monte教授发现，AD7c-NTP在AD脑内表达水平升高，与tau-1共存，与p-tau水平正相关，且出现在组织学尚完整的变性神经元中，证明异常AD7c-NTP蛋白表达增加是AD神经变性的早期事件。随后大量研究表明AD7c-NTP大量存在于AD患者脑中的神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles，NFT)中，主要与诱发神经炎症及细胞死亡有关。

最新的研究发现，尿液中AD7c-NTP的分子质量与脑脊液和脑组织中相同，且AD患者尿样中AD7C-NTP水平的检测与CSF中AD7C-NTP的检测具有同样的意义。作为一种非侵入性测试，尿液样本中AD7c-NTP的检测比脑脊液样本的检测更为重要，更易于为患者接受和推广，更适合于高危人群的早期筛查。有望成为诊断阿尔茨海默氏病的一种新的有用的生物标志物。

目前，已有专利文献公开了对AD7c-NTP的检测方法，主要以ELISA法为主，如CN202021178022.4公开了一种快速检测的免疫层析试纸条。试纸条将表面修饰了ADc-NTP单克隆抗体Ⅰ的荧光微球喷涂在聚酯膜上得到探针固定垫，AD7c-NTP单克隆抗体2包被在检测膜检测线上，兔抗鼠lgG抗体包被在检测膜的质控线上；CN201911296997.9公开了一种ELISA神经丝蛋白体外诊断试剂盒。用包被有AD7c-NTP单克隆抗体Ⅰ的微孔板和辣根过氧化物酶(HRP)标记AD7c-NTP抗体Ⅱ，在与待测标本中相应的抗原发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入显色液显色。但ELISA法线性范围窄、操作繁琐等弊端也存在于这些检测方法上。因此，需要设计一款更为通用的神经元丝状蛋白磁微粒免疫检测试剂盒。

发明内容