[发明专利]一种检测Y染色体微缺失与微重复的探针组合、试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及染色体变异检测领域，特别涉及一种检测Y染色体微缺失与微重复的探针组合、试剂盒及其应用，其中，一种探针组合包括针对Y染色体25个检测点位(6个基本点位与19个扩展点位)的特异性探针。采用本发明提供的探针组合进行检测仅需在在同一个反应管内针对待检DNA同时检测Y染色体微缺失与微重复、检测25个点位、判断变异区间范围、涉及的基因，其中含6个基本点位与19个扩展点位的兼具定性与定量功能的方法，该技术手段可应用于精液、外周血、组织等各种标本，样本量要求只需20‑50ngDNA；检测时间短、经济简便、减少人工操作错误，适用于多种类型的样本，结构判读直观且准确，易于普及。

技术领域

本发明涉及染色体变异检测领域，特别涉及一种检测Y染色体微缺失与微重复的探针组合、试剂盒及其应用。

背景技术

Y染色体微缺失是男性生精障碍的第二常见遗传原因。相关的染色体微小缺失集中在Y染色体长臂的三个特定区域上(如图1所示)，分别为AZFa(15.2-13.1Mb),AZFb(22.8-18.5Mb)和AZFc(25.5-23.3Mb)，缺失可波及单个或多个亚区，导致不同的临床表型。欧洲男性科学院(EAA)和欧洲分子遗传学质量网络(EMQN)推荐为无精症和严重少精症男性的常规检查项目，其中AZFa亚区的sY84和sY86位点，AZFb亚区的sY127和sY134位点，以及AZFc亚区的sY254和sY255位点，这6个关键点位为重要检测目标。

最新研究发现，1.6Mbgr/gr缺失是精子生成受损的重要危险因素，然而gr/gr缺失患者的临床表型差异较大，该缺失甚至在生育男性中出现的频率很高，除了种族因素之外，若合并AZF区域内b2/b4重复，生精功能可与正常人无异，表明该区域基因型-表型关联的复杂性，以及针对性进一步扩展分析与对序列重复检测的必要性。

欧洲男科学协会(EAA)和欧洲分子遗传实验质控网(EMQN)联合出版的Y染色体微缺失分子诊断操作指南中,将Y染色体微缺失作为无精子症和寡精子症不育患者的常规检查项目，推荐检测目标包括6个基本点位与12个扩展点位，指南附件C针对商品化试剂盒进行评估。

如公开号为CN106148484B，公开日期为2019年10月25日，名称为《一种诊断Y染色体微缺失的试剂盒》的专利文件公开了一种试剂盒，该试剂盒使用荧光探针多重PCR法，检测AZF区域6个基本点位。另外，新兴的二代测序技术与基因芯片技术也可用于诊断Y染色体微缺失与微重复，但是该方法价格昂过、耗时长、所需DNA样本量大，一般需要300-500ng，难以普及。

但是目前的试剂盒只能检测目标区域内的染色体片段缺失，无法检测目标内的染色体片段重复；同时只能检测6个基本点位，无法进行扩展分析，难以判断病变区间范围与涉及的基因。

发明内容

为解决上述背景技术中提到的目前试剂盒只能检测染色体片段缺失，无法检测片段重复的不足，本发明提供一种检测Y染色体微缺失与微重复的探针组合，包括针对Y染色体上Yq:AZFa、Yq:AZFb、Yq:AZFc、Yp、AZFa/b之间、Yq和Yq:AZFb/c区域内共25个检测点位的特异性探针，具体序列如下：

针对染色体上Yq:AZFa区域的sY746检测点位的特异性探针序列如SEQ ID NO.1～2所示；

针对染色体上Yp区域的TSPY检测点位的特异性探针序列如SEQ ID NO.3～4所示；

针对染色体上Yq:AZFa区域的UTY检测点位的特异性探针序列如SEQ ID NO.5～6所示；

针对染色体上Yq:AZFb区域的XKPY检测点位的特异性探针序列如SEQ ID NO.7～8所示；

针对染色体上Yq:AZFc区域的DAZ1检测点位的特异性探针序列如SEQ ID NO.9～10所示；

针对染色体上Xp区域的AMELX检测点位的特异性探针序列如SEQ ID NO.11～12所示；