[发明专利]一种大批量、快速研磨植物组织的方法

说明书

本发明属于生物化学与分子生物学技术领域，具体涉及一种大批量、快速研磨植物组织的方法。本发明将植物组织样品和灭菌的小球放入灭菌的离心管中，封闭离心管口，置于含有液氮的耐低温容器中，封闭耐低温容器口；静置1～2min后，倒出液氮，再封闭耐低温容器口，摇甩耐低温容器若干次，得研磨样品。实施例结果表明，本发明研磨方法样品损耗量小，操作时间短，简单方便，实用性强，可避免样品交叉污染，工作效率高，技术优势，提取后所得的DNA或RNA的纯度和浓度较高，提取得到的RNA中没有蛋白质、酚类及DNA的污染，提取得到的DNA中没有蛋白质、酚类及RNA的污染。

技术领域

本发明属于生物化学与分子生物学技术领域，具体涉及一种大批量、快速研磨植物组织的方法。

背景技术

从植物组织中提取纯度高、完整性好的DNA和/或RNA是进行基因克隆、基因表达调控等植物分子生物学研究的必要前提；在提取DNA和/或RNA的过程中，通常需要借助研磨器对植物组织进行研磨，传统的研磨方法是将样品放入研钵或离心管，经过液氮冷冻处理后，利用研杵、研磨棒进行手工研磨，但是此类方法一次只能研磨一个样品，工作效率低，还费时费力，并且研磨时处于开放状态，研磨过程中样品易溅出，导致样品损失，还会受到环境中DNA酶或RNA酶及其他物质的污染，进而影响后续提取过程，使提取得到的DNA和/或RNA降解、杂质多，纯度低，难以达到后续实验的要求。

虽然，现有技术可采用研磨仪进行研磨，但市面上的研磨仪价格昂贵，且研磨仪的研磨孔洞数量有限，若大批量进行研磨需分批次进行研磨，不可以根据样品调整研磨力度，且在研磨前需对研磨孔洞进行液氮预冷，随着研磨时间的增加研磨孔洞预冷效果下降加大了提取DNA和/或RNA降解的风险。因此，对植物组织中活性生物大分子进行提取时，需要开发一种快速、简易、经济的研磨植物组织方法，降低样品在研磨中的损失，减少污染，提高研磨效率。

发明内容

本发明的目的在于提供一种大批量、快速研磨植物组织的方法，在短时间内将植物组织研磨成粉末，降低污染，提高从植物组织中提取DNA和/或RNA的得率及纯度。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了一种大批量、快速研磨植物组织的方法，包括以下步骤：

将植物组织样品和灭菌小球放入已灭菌且无核酸酶的圆底离心管中，盖上圆底离心管的盖子，置于装有液氮的耐低温容器中，封闭耐低温容器口预冷1～2min；

所述预冷后倒出耐低温容器中的液氮，再次封闭耐低温容器口，摇甩耐低温容器若干次，得研磨样品。

优选的，所述摇甩的方式包括：使所述耐低温容器处于初始方位，手动上下以每秒3次的速度摇甩所述耐低温容器，摇甩6秒后，在水平面内使所述耐低温容器至少产生一次旋转，以转换到至少一个研磨方位上，继续手动上下以每秒3次的速度摇甩所述耐低温容器，摇甩6秒；所述每秒3次以手动连续一上一下为1次。

优选的，通过更换手固定位置实现所述低温容器在初始状态与研磨方位之间的转换；当所述耐低温容器为立方体形时，在四个侧面分别选取手所固定位置，确定四个手持位置；更换摇甩固定位置的次数为4～8次。

优选的，在所述耐低温容器中，所述液氮的液面高度与为所述低温容器高度的比值为3:4。

优选的，单个圆底离心管中灭菌小球的个数为1～2个，所述灭菌小球的直径为4～6mm。

优选的，所述灭菌小球为将小球进行灭菌得到；所述灭菌前，使用体积浓度为75％的酒精浸没小球1h。

优选的，所述小球为不锈钢小球。

本发明还提供了上述方法得到的研磨样品在提取植物组织DNA和/或RNA中的应用。