[发明专利]一种胶体金免疫层析试纸、制备方法及应用

权利要求书

1.一种胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，所述胶体金免疫层析试纸的制备方法包括以下步骤：

步骤一，胶体金的制备；

步骤二，胶体金最适标记pH浓度的确定；

步骤三，胶体金最适标记蛋白浓度的确定；

步骤四，胶体金标记抗体制备；

步骤五，胶体金层析免疫试纸条的组装；

步骤六，胶体金免疫层析试纸条的性能考察。

2.如权利要求1所述胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，步骤一中，所述胶体金的制备，包括：分别采用柠檬酸钠还原法和Tris辅助法制备胶体金，并观察胶体金的颜色和透明度的外观特征；利用紫外分光光度计扫描紫外吸收图谱，通过粒径分析仪测定粒径大小及分布情况，采用透射电镜测定胶体金的均一性和颗粒大小；

所述Tris辅助法制备胶体金，包括：量取140mL纯净水于三颈烧瓶中，放入搅拌子，将三颈烧瓶放置在油浴锅中油浴加热；三颈烧瓶上方连接冷凝管，设定磁力加热搅拌器温度为137℃，搅拌转速为900rpm；油浴温度到达100℃，将10mL 1％柠檬酸钠溶液加入到三颈烧瓶中；继续加热40min，温度稳定于137℃附近，从侧边的口中注入1mL 1％氯金酸溶液；60s后，再将5mL 0.1M Tris-base溶液注入三颈烧瓶中的漩涡中心处，塞上空心塞；反应30min后，将温度设置成100℃，开启通风橱加速降温；油浴温度到达100℃时，一次性快速将1mL 1％氯金酸注至三颈烧瓶中的漩涡中心处，反应30min；重复上一步骤，反应结束后停止加热；在搅拌状态下自然冷却至室温；避光，常温保存。

3.如权利要求2所述胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，所述油浴为二甲基硅油。

4.如权利要求1所述胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，步骤二中，所述胶体金最适标记pH浓度的确定，包括：取6只1.5mL透明玻璃瓶，每管加入1mL胶体金溶液，加入5μg轮状病毒特异性抗体Ab2，分别加入不同体积的0.1mol/LK₂CO₃调整pH，确定最适标记pH浓度。

5.如权利要求1所述胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，步骤三中，所述胶体金最适标记蛋白浓度的确定，包括：取6只1.5mL的透明玻璃瓶，每管加入1mL胶体金溶液，加入2μL 0.1mol/L的K₂CO₃，加入不同体积的轮状病毒特异性抗体Ab2，确定最适标记蛋白浓度。

6.如权利要求1所述胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，步骤四中，所述胶体金标记抗体制备，包括：将制备的胶体金与轮状病毒特异性单抗Ab2进行偶联；将1mL胶体金和2μL 0.1M的K₂CO₃混匀，再加入1μL4.9mg/mL的轮状病毒Ab2抗体，静置1h；反应结束后，10％BSA溶液封闭30min；8000g转速下离心15min，弃上清，沉淀用偶联复溶液按300倍比例稀释，均匀喷涂于结合垫上，37℃烘干3h。

7.如权利要求1所述胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，步骤五中，所述胶体金层析免疫试纸条的组装，包括：利用接触式自动划膜仪将轮状病毒捕获抗体Ab1与羊抗鼠IgG包被在NC膜上作为检测线T与质控线C，37℃烘干；将样品垫、结合垫、包被有T线与C线的NC膜和吸水纸组装到PVC底板上，采用数控裁条机裁成3.0mm宽的试纸条，干燥条件下避光保存备用。