[发明专利]一种检测藜麦茎腐病菌的引物组和试剂盒及其检测方法在审
| 申请号： | 202111395169.8 | 申请日： | 2021-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN114032334A | 公开（公告）日： | 2022-02-11 |
| 发明（设计）人： | 王伟青;董杰;杨新建;田璐;邓志峰;句荣辉 | 申请（专利权）人： | 北京农业职业学院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/94 |
| 代理公司： | 北京睿智保诚专利代理事务所(普通合伙) 11732 | 代理人： | 周新楣 |
| 地址： | 102442*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 藜麦茎腐 病菌 引物 试剂盒 及其 方法 | ||
1.一种检测藜麦茎腐病菌的引物组，其特征在于，包括上游检测引物JP1和下游检测引物JP2；所述上游检测引物JP1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述下游检测引物JP2的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
2.一种检测藜麦茎腐病菌的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物组和检测试剂。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述检测试剂包括2×Pfu-PCRMasterMIX，通用引物ITS1/ITS4，检测引物JP1/JP2和ddH2O。
4.一种利用权利要求1所述引物组检测藜麦茎腐病菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取样品的基因组DNA；
(2)以步骤(1)中提取的基因组DNA为模板，利用通用引物ITS1/ITS4进行第一轮PCR扩增，获得扩增产物；
(3)以步骤(2)中所述扩增产物为模板，利用权利要求1中所述的检测引物进行第二轮PCR扩增，根据扩增结果判定样品中是否含有藜麦茎腐病菌，若扩增产物出现500bp大小的条带，则样品中存在藜麦茎腐病菌；否则，不存在。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中第一轮PCR扩增的反应程序为：95℃预变性3min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸60s，变性、退火、延伸进行35个循环；72℃最终延伸5min。
6.根据权利要求4～5任意一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中第一轮PCR扩增的体系，以50μl计，包括以下组分：2×Pfu-PCR MasterMIX25μl，10μM的引物ITS12μl，10μM的引物ITS42μl，模板2μl，ddH2O 19μl。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中第二轮PCR扩增的反应程序为：95℃预变性5min；94℃变性40s，55℃退火40s，72℃延伸60s，变性、退火、延伸进行35个循环；72℃最终延伸5min。
8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中第二轮PCR扩增的体系，以50μl计，包括以下组分：2×Pfu-PCR MasterMIX 25μl，10μM的引物JP14μl，10μM的引物JP24μl，模板4μl，ddH2O 13μl。
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