[发明专利]一种检测藜麦茎腐病菌的引物组和试剂盒及其检测方法

说明书

本发明涉及植物病原菌检测技术领域，提供了一种检测藜麦茎腐病菌的引物组和试剂盒及其检测方法。所述引物组包括上游检测引物JP1和下游检测引物JP2；所述上游检测引物JP1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述下游检测引物JP2的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明的试剂盒具有灵敏度高、特异性强、检测准确度高的优点，可用于藜麦茎腐病菌(叶片，茎段和土壤中)的检测，对藜麦茎腐病菌病害的早期快速检测、土壤病菌群体分布及病害的防治具有重要意义。

技术领域

本发明涉及植物病原菌检测技术领域，尤其涉及一种检测藜麦茎腐病菌的引物组和试剂盒及其检测方法。

背景技术

黎麦起源于南美洲安第斯山脉，已有5000多年的栽培历史，又称藜谷、南美藜、昆诺阿藜等，整个生育期会受多种病虫害的侵染。目前报道的藜麦病害有分生孢子叶斑病、甲孢叶斑病或尾孢叶斑病、黑斑病、叶斑病、穗枯病、褐斑病、菌核病、叶霉病、霜霉病、黑茎病、病毒病、根腐病和炭疽病，其中茎腐病和叶斑病是中国藜麦危害最严重的病害。

黎麦茎腐病原菌主要侵染藜麦植株的茎杆和顶梢部分，症状初期为水浸状小斑点，环绕茎杆逐渐扩展，导致茎杆变褐色腐烂，形成软腐状。湿度大时，在茎杆上逐渐长出排列整齐、繁茂的真菌菌丝，顶部为黑色或深褐色的球状大型孢子囊和小型孢子囊。植株茎杆侵染后变褐色枯死并产生了大量的病菌孢子引起植株顶梢枯死。

藜麦叶斑病症状为圆形或近圆形斑点，直径1～4mm。斑点边缘为棕色，中心为黄色和白色，斑点上有小黑点，在疾病晚期有中央穿孔。主要的病原菌有藜钉孢，交链格孢菌、细极链格孢菌、芸薹链格孢菌，感病初期将会出现一些黄色或者斑点，后期逐渐变为一种褐色或深褐色螺纹状，严重时病斑中央将产生穿孔现象，病斑大小程度不一。

目前对植物真菌的检测有以下几种方法：采用半选择性培养基或液体培养基分离培养，但其结果易受其它杂菌的干扰，且需要进行再接种的生物学试验才能确定。幼苗生长法鉴定需要一个具有一定温湿度环境的温室，一个种子批至少种植10000株幼苗，如果有大量的样品需要鉴定时，工作量大，费时费力。最近发展起来的实时荧光PCR有较高的检测效率和灵敏度，但需要更昂贵的试剂和仪器，适合于相关的科学研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测藜麦茎腐病菌的引物组和试剂盒及其检测方法，具有灵敏度高、特异性强、检测准确度高的优点，可用于藜麦茎腐病菌(叶片，茎段和土壤中)的检测，对藜麦茎腐病菌病害的早期快速检测、土壤病菌群体分布及病害的防治具有重要意义。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种检测藜麦茎腐病菌的引物组，包括上游检测引物JP1和下游检测引物JP2；所述上游检测引物JP1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述下游检测引物JP2的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

JP1(SEQ ID NO:1)：5’-GTTTTCCATAGAGTGGGTGT-3’；

JP2(SEQ ID NO:2)：5’-GAGTTTCCTCCGGCTTATTG-3’。

本发明提供了一种检测藜麦茎腐病菌的试剂盒，包括检测引物JP1/JP2和检测试剂。

进一步地，检测试剂包括2×Pfu-PCR MasterMIX，通用引物ITS1/ITS4，检测引物JP1/JP2和ddH₂O。

本发明还提供了利用所述引物组检测藜麦茎腐病菌的方法，包括以下步骤：

(1)提取样品的基因组DNA；

(2)以步骤(1)中提取的基因组DNA为模板，利用通用引物ITS1/ITS4进行第一轮PCR扩增，获得扩增产物；