[发明专利]一种抑制鸡CA13基因表达的shRNA及其应用

权利要求书

1.一种抑制鸡CA13基因表达的shRNA的编码DNA序列，其特征在于，所述shRNA的编码DNA序列为以下CA38、CA39、CA40中的任意一条，每一条包括正义链和反义链；

CA38-a正义链：

5’-CCGGGCCAGTCACCTATTGACATCACTCGAGTGATGTCAATAGGTGACTGGCTTTTTG-3’，其具有序列表SEQ ID NO:1碱基序列；

CA38-b反义链：

5’-AATTCAAAAAGCCAGTCACCTATTGACATCACTCGAGTGATGTCAATAGGTGACTGGC-3’，其具有序列表SEQ ID O:2碱基序列；

CA39-a正义链：

5’-CCGGGGACTACTGGACTTACTTTGGCTCGAGCCAAAGTAAGTCCAGTAGTCCTTTTTG-3’，其具有序列表SEQ ID NO:3碱基序列；

CA39-b反义链：

5’-AATTCAAAAAGGACTACTGGACTTACTTTGGCTCGAGCCAAAGTAAGTCCAGTAGTCC-3’，其具有序列表SEQ ID NO:4碱基序列；

CA40-a正义链：

5’-CCGGGCTCGTCAGTCAGATGGATTGCTCGAGCAATCCATCTGACTGACGAGCTTTTTG-3’，其具有序列表SEQ ID NO:5碱基序列；

CA40-b反义链：

5’-AATTCAAAAAGCTCGTCAGTCAGATGGATTGCTCGAGCAATCCATCTGACTGACGAGC-3’，其具有序列表SEQ ID NO:6碱基序列；

其中，CTCGAG为loop序列。

2.根据权利要求1所述的一种抑制鸡CA13基因表达的shRNA的编码DNA序列在制备抑制鸡CA13基因表达的shRNA中的应用。

3.一种慢病毒表达载体，其特征在于，所述慢病毒表达载体含有权利要求1所述的抑制鸡CA13基因表达的shRNA的编码DNA序列。

4.一种如权利要求3所述的慢病毒表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)分别合成抑制鸡CA13基因表达的shRNA的编码DNA序列的正义链和反义链；

(2)将正义链和反义链序列混合进行退火，形成带有粘性末端的双链DNA；

(3)将慢病毒载体双酶切后，得到线性化的慢病毒载体；

(4)将步骤(2)中的双链DNA和步骤(3)中的线性化的慢病毒载体进行连接，转入大肠杆菌感受态细胞，涂布在含有抗生素的平板上，挑取平板上的单克隆进行测序验证，构建得到慢病毒表达载体。

5.根据权利要求4所述的慢病毒表达载体的构建方法，其特征在于，所述慢病毒载体为GV248载体。

6.根据权利要求3所述的一种慢病毒表达载体在制备抑制鸡CA13基因表达的shRNA中的应用。