[发明专利]一种农杆菌转化裂殖壶菌的方法和应用

权利要求书

1.一种农杆菌转化裂殖壶菌的方法，其特征在于，使用农杆菌将外源基因转化进入裂殖壶菌体内，使裂殖壶菌获得导入的外源基因的功能。

2.根据权利要求1所述的农杆菌转化裂殖壶菌的方法，其特征在于，所述农杆菌原始菌株为AGL-1。

3.根据权利要求1所述的农杆菌转化裂殖壶菌的方法，其特征在于，所述农杆菌为被转入G418抗性基因表达盒的农杆菌AGL-1。

4.根据权利要求4所述的农杆菌转化裂殖壶菌的方法，其特征在于，所述G418抗性基因NeoR表达盒，如序列SEQ ID NO.1所示。

5.根据权利要求3所述的农杆菌转化裂殖壶菌的方法，其特征在于，所述G418抗性基因表达盒的启动子为裂殖壶菌的内源性启动子P2845，如序列SEQ ID NO.2所示；所述G418抗性基因为NeoR，如序列SEQ ID NO.3所示；所述G418抗性基因表达盒的终止子为裂殖壶菌的内源性终止子T2845，如序列SEQ ID NO.4所示。

6.根据权利要求1所述的农杆菌转化裂殖壶菌的方法，其特征在于，所述裂殖壶菌菌株优选为HX-308。

7.根据权利要求1所述的农杆菌转化裂殖壶菌的方法，其特征在于，所述农杆菌转化裂殖壶菌的方法具体包括如下步骤：

(1)重组质粒pZPK-P2845-NeoR-T2845的构建：

以pZPK为骨架，插入了裂殖壶菌HX-308的启动子P2845和终止子T2845，在启动子和终止子中间插入G418抗性基因NeoR，得到重组质粒pZPK-P2845-NeoR-T2845；

(2)农杆菌AGL-1待转化菌株的构建：

将重组质粒pZPK-P2845-NeoR-T2845转化进入农杆菌体内，挑选出阳性单克隆，接种于液体培养基活化，活化完成后取农杆菌接种于含有乙酰丁香酮的液体培养基进行诱导；

(3)裂殖壶菌HX-308感受态的制备：

裂殖壶菌活化，挑取单克隆接种于液体培养基过夜活化，吸取活化菌液接种于新的液体培养基再次活化；

(4)农杆菌AGL-1和裂殖壶菌HX-308共培养：

将诱导后的农杆菌和活化好的裂殖壶菌，涂布于含有乙酰丁香酮的诱导固体培养基进行共培养；

(5)裂殖壶菌转化子的筛选：

将共培养菌体冲洗下来，涂布于含有头孢噻肟钠和G418的固体培养基进行筛选，得到转化后的裂殖壶菌。

8.根据权利要求7所述的农杆菌转化裂殖壶菌的方法，其特征在于，所述步骤(4)中共培养时间≥24h，温度为28-30℃。

9.根据权利要求7所述的农杆菌转化裂殖壶菌的方法，其特征在于，所述步骤(5)中培养条件为28-30℃，培养时间为3-7天。

10.一种权利要求1所述的农杆菌转化裂殖壶菌的方法在裂殖壶菌的DNA转化和代谢工程改造中的应用。