[发明专利]一种原代汗腺细胞条件培养基及原代汗腺细胞培养方法

权利要求书

1.一种原代汗腺细胞条件培养基，其特征在于，包括细胞基础培养基、血清、Glutamax、缓冲液、细胞培养添加剂、青霉素/链霉素、表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、非必需氨基酸、胰岛素、ROCK抑制剂及NF-κB激动剂。

2.根据权利要求1所述的原代汗腺细胞条件培养基，其特征在于，所述NF-κB激动剂为佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯。

3.根据权利要求2所述的原代汗腺细胞条件培养基，其特征在于，佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯的含量为0.01～0.05μg/mL。

4.根据权利要求1所述的原代汗腺条件细胞培养基，其特征在于，所述细胞基础培养基为DMEM/F12培养基。

5.根据权利要求1所述的原代汗腺细胞条件培养基，其特征在于，所述细胞培养添加剂为B27。

6.根据权利要求1所述的原代汗腺细胞条件培养基，其特征在于，所述ROCK抑制剂为Y-33075。

7.根据权利要求6所述的原代汗腺细胞条件培养基，其特征在于，所述表皮细胞生长因子的含量为20～50ng/mL、所述碱性成纤维细胞生长因子的含量为10～20ng/mL、所述Y-33075的含量为0.5～1μM。

8.一种原代汗腺细胞培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

取细胞培养皿，加入如权利要求1～7任一所述的原代汗腺细胞条件培养基；

将原代汗腺组织加入所述细胞培养皿中，待汗腺组织贴壁后，补加所述原代汗腺细胞条件培养基，且每隔2～3天换液一次；

在汗腺细胞融合度达到70％-80％时，进行消化传代，获得扩增后的汗腺细胞。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，在加入原代汗腺细胞条件培养基的步骤之前，所述方法还包括：

向所述细胞培养皿中加入胶原蛋白，然后置于CO₂培养箱中进行包被处理后吸掉胶原蛋白，并用磷酸缓冲盐溶液清洗。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述消化传代的过程包括：

弃掉培养基，用磷酸缓冲盐溶液清洗后加入细胞消化液，置于CO₂培养箱中进行消化，待细胞漂浮时加入所述原代汗腺细胞条件培养基终止消化；

将终止消化后的培养液混匀，然后按1:2进行传代，加入包被处理后的细胞培养皿中，再置于CO₂培养箱中培养，待汗腺细胞贴壁后利用所述原代汗腺细胞培养基进行换液，且每隔2～3天换液一次。