[发明专利]一种床旁快速检测HPV的LAMP引物组、试剂盒及其使用方法

说明书

本发明公开了一种床旁快速检测HPV的LAMP引物组、试剂盒及其使用方法，属于生物检测技术领域。首先，提供用于检测的LAMP引物组，可有效保证检测特异性和灵敏度等；其次，将其应用于制备HPV检测试剂盒或试剂中，再经体系溶液组分的最佳配比的优化，将DNA提取和扩增合并为一步法，缩短LAMP反应时间，使总反应时间缩短至40min以内，同时，显示出较高的灵敏度和极好的特异性；最后，针对试剂盒，提供一种床旁快速检测HPV的试剂盒的使用方法，具体包括样本采集、裂解、扩增和判别等。此外，考虑到环境污染问题，发明人还特别设计密闭式废液收集腔，以达到消除污染的目的。

技术领域

本发明涉及一种HPV检测的引物组、试剂盒及其使用方法，尤其涉及一种床旁快速检测HPV的LAMP引物组、试剂盒及其使用方法，属于生物检测技术领域。

背景技术

人乳头瘤状病毒（HPV）是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡DNA病毒，可在人体内广泛传播，持续感染可导致皮肤黏膜的赘生物、尖锐湿疣和宫颈癌等，因此，快速准确检测HPV对降低宫颈癌发病率具有极为重要的意义。传统的HPV检测方法包括：细胞组织病理学检测、阴道镜检测、电镜检测和宫颈荧光检查等，这些检测方法存在明显的缺点：灵敏度低、特异性差、不能对HPV进行分型，导致无法在临床上常规使用。目前，临床上常规的HPV检测方法主要是：实时荧光PCR、杂交捕获-化学发光和PCR毛细电泳片段分析法等，但存在均需专业设备、专业人员操作，且耗时较长等缺点。

现有技术“CN110607399A，用于LAMP扩增以检测HPV和分型的引物组合、试剂盒和方法”中公开包含HPV16E6、HPV18E6、HPV31E6、HPV33E7、HPV35E6、HPV39E6、HPV45E7、HPV51E6E7、HPV52E6E7、HPV56E6、HPV58E6、HPV59E6、HPV66E6、HPV68E6和HPV73E6E7等LAMP扩增引物组，采用上述引物组合检测HPV的亚型，但该方法具有以下不足：（1）需要提取DNA，耗时2小时以上；（2）LAMP扩增反应1小时。

此外，“CN104805218A基于LAMP和分子信标检测HPV16和18的反应体系和方法”中仅检测了HPV16和HPV18，以及该方法存在以下缺点：(1)反应体系中含有分子信标探针，价格较高；（2）耗时久，超过60分钟；（3）LAMP反应后，需要在4℃、65℃和95℃条件下用紫外灯照射观察荧光，操作繁琐且需专业设备：紫外灯；“CN106148571A检测人乳头瘤病毒HPV16和HPV18的成套试剂”中检测时间较长，约1小时，且需紫外灯；“CN106939359A一种LAMP法检测HPV常见亚型的引物组及检测体系”中检测了HPV6、HPV11、HPV16、HPV42、HPV43和HPV44，涉及的检测方法耗时较长，超过1小时；需要专门设备，例如：荧光定量PCR仪、涡旋混合器、震荡型恒温金属浴、高速低温离心机、电泳仪、凝胶成像分析仪、流式点阵仪、实时浊度测定仪、电子分析天平、超纯水仪等；“CN110093459A用于快速检测13种高危型HPV的LAMP引物组合及应用”中耗时超过1小时，且在反应过程中，需要借助浊度仪检测浊度绘制“S”型曲线。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，而提出了一种床旁快速检测HPV的LAMP引物组、试剂盒及其使用方法。其中，发明人针对样本LAMP引物组、裂解液和反应体系开展了大量研发工作，筛选了特异性较强的LAMP引物组，以及优化了体系溶液组分的最佳配比，并将DNA提取和扩增合并为一步法，缩短LAMP反应时间，使总反应时间缩短至40min以内，同时，显示出较高的灵敏度和极好的特异性。此外，考虑到环境污染问题，发明人还特别设计密闭式废液收集腔，以达到消除污染的目的。

为了实现上述技术目的，提出如下的技术方案：

本技术方案提出：一种床旁快速检测HPV的LAMP引物组，包括如下核苷酸序列对组合：

进一步的，所述HPV包括亚型HPV16、HPV18、HPV33、HPV52、HPV56、HPV58和HPV68。