[发明专利]一种脐带间充质干细胞的制备方法

权利要求书

1.一种脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于：包括将获取自脐带的华通氏胶剪成不大于2mm³的组织块，采用浓度大于或等于1％的胶原酶在37℃～39℃下对华通氏胶组织块进行30-60分钟的消化，分别对消化获得的悬浮液和消化后组织块进行间充质干细胞培养，获得所述脐带间充质干细胞。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述华通氏胶采用以下方法获得，取离体的脐带，在无菌条件下去除静脉和动脉，剥离脐带外膜，即获得所述华通氏胶。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述胶原酶为II型胶原酶或IV型胶原酶。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述胶原酶采用Hanks缓冲液制备。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述分别对消化获得的悬浮液和消化后组织块进行间充质干细胞培养，具体包括，消化完成后，采用缓冲液进行清洗，离心去上清液，再采用缓冲液重悬；采用网筛过滤分离缓冲液重悬的细胞悬浮液和消化后组织块；对网筛分离获得的细胞悬浮液进行离心，去上清液，采用培养基重悬后进行间充质干细胞培养；对网筛分离获得的消化后组织块，直接加入培养基进行间充质干细胞培养。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述缓冲液为D-Hanks缓冲液。

7.根据权利要求1-6任一项所述的制备方法，其特征在于：所述间充质干细胞培养采用的培养基为含有10％胎牛血清的DMEM/F12培养基。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述培养基中还含有细胞因子bFGF和EGF。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述培养基中还含有ITS细胞培养添加物。

10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述间充质干细胞培养的条件为，在5％二氧化碳的培养箱中，室温培养24-48小时后换液，之后每2-3天换液。