[发明专利]寡核糖核苷酸的纯化方法及试剂盒有效
申请号: | 202111411057.7 | 申请日: | 2021-11-25 |
公开(公告)号: | CN114317521B | 公开(公告)日: | 2022-10-11 |
发明(设计)人: | 杜军;李刚;夏海原;李妍;王文朋;吴慧 | 申请(专利权)人: | 北京擎科生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 北京汇知杰知识产权代理有限公司 11587 | 代理人: | 杨巍;柴春玲 |
地址: | 100176 北京市大兴区北京*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 核糖 核苷酸 纯化 方法 试剂盒 | ||
1.一种用于纯化寡核糖核苷酸(RNA)的方法,包括以下步骤:
a)通过向合成的寡核糖核苷酸粗品中加入脱2’-羟基保护基的脱保护溶液以提供寡核糖核苷酸溶液;
b)将高氯酸盐溶液与所述寡核糖核苷酸溶液混合,然后于20℃至-40℃保持10分钟至60分钟以形成沉淀;
c)分离步骤b)中所得到的沉淀以得到经纯化的寡核糖核苷酸;其中所述纯化寡核糖核苷酸的方法不包括使用醇类对寡核糖核苷酸进行沉淀;
其中所述高氯酸盐为高氯酸钠或高氯酸锂;
所述高氯酸盐溶液的溶剂为丙酮、乙腈、四氢呋喃、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺或碳酸丙烯酯;
其中在步骤b)中,所述高氯酸盐溶液的质量体积浓度为0.5%w/v至2%w/v;所述高氯酸盐溶液与所述脱保护溶液的体积比为0.8至1.2:1。
2.根据权利要求1所述的方法,其中所述脱保护溶液为极性溶剂和三烷基胺-氢氟化物。
3.根据权利要求2所述的方法,其中所述脱保护溶液为DMSO和三乙胺三氢氟酸盐。
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法,其中所述高氯酸盐为高氯酸钠。
5.根据权利要求1-3任一项所述的方法,其中在步骤b)中,将所述高氯酸盐溶液与所述寡核糖核苷酸溶液混合,然后于-20℃保持30分钟。
6.根据权利要求1-3任一项所述的方法,其中步骤c)中的分离通过离心、重力沉降或/和过滤中的一种或多种进行。
7.根据权利要求1-3任一项所述的方法,其中所述寡核糖核苷酸的长度≤25个核糖核苷酸。
8.根据权利要求7所述的方法,其中所述寡核糖核苷酸的长度≤10个核糖核苷酸。
9.根据权利要求1-3任一项所述的方法,其中所述寡核糖核苷酸含有40%至100%的尿嘧啶。
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