[发明专利]一种红细胞中叶酸的量子点荧光检测方法

权利要求书

1.一种红细胞中叶酸的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括一种基于量子点荧光检测叶酸的试纸条；还包括预处理试剂及解离剂；

所述预处理试剂为抗坏血酸及硫代甘油的组合；所述抗坏血酸盐为抗坏血酸钠；所述抗坏血酸盐的浓度为0.1~0.3%；所述硫代甘油的浓度为0.3~0.7%；所述预处理时间为25~35min；

所述解离剂的成分如下：2~4%甲醇，0.03~0.07%三(2-氯乙基)磷酸酯，0.4~0.6mg/mL胶乳微球标记的抗血红蛋白多克隆抗体溶于Tris-HCL缓冲液中，所述Tris-HCl缓冲液pH为8.0~9.0，离子强度为20mM~100mM；

所述基于量子点荧光检测叶酸的试纸条具有滤膜对待测样品进行过滤；所述试纸条的层析结构按照样品的层析方向依次设置滤膜、样品垫、结合垫、反应膜及吸水材料，上述五种材料相邻部分接壤；所述滤膜、样品垫、结合垫及反应膜依次搭接，所述吸水材料与反应膜接触的部分搭在反应膜上；

所述反应膜为硝酸纤维素膜，按照层析方向设置血红蛋白拦截线、检测线及质控线；所述血红蛋白拦截线处固定有血红蛋白的特异性吸附物质，所述检测线固定叶酸偶联抗原，所述质控线处固定IgG抗体。

2.如权利要求1所述红细胞中叶酸的检测试剂盒，其特征在于，所述血红蛋白的特异性吸附物质为血红蛋白的单克隆抗体；

所述滤膜为硝酸纤维素、醋酸纤维素或PVDF；

所述结合垫为玻璃纤维材质或聚酯纤维材质，结合垫上喷涂有量子点标记叶酸单克隆抗体，所述量子点标记叶酸单克隆抗体采用如下方式制备：

将CdSe/ZnS量子点加入缓冲液中活化量子点羧基后，将其与所述叶酸单克隆抗体的氨基基团连接，并对未结合的羧基进行封闭。

3.如权利要求1所述红细胞中叶酸的检测试剂盒，其特征在于，所述试纸条使用方式如下：将解离后的待测叶酸样品滴加在样品垫上，待测样品在吸水材料的作用下，依次流经样品垫、结合垫、检测线及质控线；叶酸与预先包被在结合垫上的量子点标记的叶酸单克隆抗体结合，从而使量子点标记的叶酸单克隆抗体与检测线上的叶酸偶联抗原结合量减少，检测线荧光条带减弱或是消失，获得检测线光信号；样品中未被检测线叶酸偶联抗原拦截的量子点标记叶酸单克隆抗体与质控线上的IgG结合产生荧光，获得质控线光信号，构建检测线光信号强度与质控线光信号强度的比值与样本浓度的标准曲线，通过标准曲线计算待测样品中叶酸浓度。

4.如权利要求3所述红细胞中叶酸的检测试剂盒，其特征在于，所述光信号强度的检测通过流氏细胞检测仪、荧光分光光度计、荧光共聚焦显微镜中的一种进行检测。

5.如权利要求1所述红细胞中叶酸的检测试剂盒，其特征在于，所述试纸条还具有底板，所述底板用于承载层析结构；所述底板为PVC材质；

所述试纸条还具有辅助观测的装置，所述辅助观测装置为一种卡壳，所述卡壳由上下两部分扣合而成，卡壳上部具有通孔及通槽，所述通孔对应滤膜的位置，设置于滤膜上方，用于向检测试纸加样；所述通槽为观察窗，透过观察窗可观察到检测线及质控线。

6.一种红细胞中叶酸的量子点荧光检测方法，其特征在于，所述检测方法基于权利要求1-5所述红细胞中叶酸的检测试剂盒进行检测，包括对全血样本的预处理、解离，并对解离后样本中的叶酸进行量子点荧光检测，所述全血样本的预处理试剂为抗坏血酸及硫代甘油的组合；所述解离采用的解离剂中包括三(2-氯乙基)磷酸酯和胶乳微球标记的抗血红蛋白多克隆抗体。