[发明专利]一种红细胞中叶酸的量子点荧光检测方法

说明书

本发明涉及一种红细胞中叶酸的量子点荧光检测方法。叶酸是人体生长发育过程中必不可少的维生素，对于预防新生儿神经管畸形、降低孕妇贫血、先兆子痫等。因此，提供一种操作简便、灵敏可靠的检测方法对于孕妇等人群监控叶酸补充效果具有重要意义。本发明提供了一种红细胞中叶酸的量子点荧光检测方法，为了提高检测准确性，本发明针对检测的预处理及解离步骤进行了优化，实现了红细胞中叶酸的充分破裂和解离。本发明还提供了一种基于量子点检测的固相层析试纸条，基于该试纸条检测叶酸具有良好的精密度及灵敏度，试纸条可适应常温运输，具有理想的市场前景。

技术领域

本发明属于血液标志物检测技术领域，具体涉及一种红细胞中叶酸的量子点荧光检测方法。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

叶酸是一种水溶性B族维生素，是由蝶啶、对氨基苯甲酸和L-谷氨酸结合而成。叶酸也称蝶酰谷氨酸，是一种核酸、胸苷酸、神经递质、磷脂以及激素合成必不可少的维生素类物质，在体内作为一碳单位的载体，参与各种代谢反应。叶酸还是人体必需氨基酸（蛋氨酸）的组成部分，参与基因或非基因编码的甲基化作用。叶酸缺乏时，脱氧胸苷酸，嘌呤核苷酸的形式及氨基酸的互变受阻，细胞内DNA合成减少，细胞的分裂成熟发生障碍，引起巨幼红细胞性贫血。另外，妊娠期叶酸补充对于降低胎儿出生缺陷的发生也具有重要的意义。人体自身缺乏合成叶酸的酶，需要从饮食中摄入，摄入的叶酸主要在十二指肠及近端空肠部位吸收。吸收后的单谷氨酸叶酸，一部分以多谷氨酸叶酸形式贮存在红细胞、肝脏等组织中，一部分以单谷氨酸叶酸形式分布于血浆、组织液、胆汁及尿液中。叶酸缺乏与多种疾病的发生有关，准确检测人体内叶酸水平是评价叶酸营养状态的基础。人体叶酸水平常用血浆叶酸、血清叶酸和红细胞叶酸来衡量。血浆或血清叶酸代表体内循环状态的叶酸水平，但易受到膳食等因素影响。红细胞叶酸与红细胞更新过程有关，反映人体内叶酸的长期变化状态和叶酸储备情况，因此红细胞叶酸检测对反应机体生理状态具有重要的意义。

目前，红细胞中叶酸检测主要为微生物和竞争性放射免疫分析技术两种方法。其中，微生物检测方法操作繁琐，检测结果受微生物敏感度、样品中所含抗叶酸药物或抗生素成分的影响，检测结果缺乏重复性。放射免疫分析技术具有快速、简单的优势，但试剂生产过程中，需使用同位素对活性蛋白进行标记，因此仅有少数厂家能够生产相应试剂，检验设备昂贵；并且不同结合蛋白对各叶酸亚型反应灵敏度各不相同，导致试剂盒之间的检测结果差异很大，故其应用于临床检测的可靠性并不高；相关试剂主要活性成分为蛋白制品，外界温度变化容易导致检测试剂失活，因此竞争性放射免疫分析检测产品对生产、保存及运输环境的要求较高，增加了产品的经济成本，难以在基层医院推广。

发明内容

基于上述技术背景，本发明目的在于提供一种简便、快速、经济的红细胞叶酸检测方法。

基于上述技术目的，本发明主要提供一种红细胞中叶酸的量子点荧光检测方法，所述检测包括对全血样本的预处理、解离，并对解离后样本中的叶酸进行量子点荧光检测，其特征在于，所述预处理试剂为抗坏血酸及硫代甘油的组合；所述解离剂中至少包括三(2-氯乙基)磷酸酯和胶乳微球标记的抗血红蛋白多克隆抗体。

考虑到对红细胞中叶酸的充分提取对保证检测结果的灵敏度和准确性具有重要意义，本发明检测方法首先针对预处理和解离环节进行了优化。在预处理过程需要充分破坏红细胞的膜结构，使细胞内部的叶酸释放至试剂中，在解离剂的作用下将叶酸从游离蛋白上解离成为游离态的叶酸，以便进行后续的免疫学检测。经本发明验证，上述预处理过程中，抗坏血酸盐起到破坏细胞膜的作用，硫代甘油防止红细胞中的叶酸被血浆结合酶分解，两者配合能够很好的保障膜结构裂解过程中，叶酸不被破坏。所述解离剂三(2-氯乙基)磷酸酯作用于蛋白质的二硫键，将叶酸从结合蛋白上解离下来，由结合态变为游离态。