[发明专利]一种重组细胞株HSCT6-rADHI及其构建方法与应用在审
| 申请号： | 202111415431.0 | 申请日： | 2021-11-25 |
| 公开（公告）号： | CN114107216A | 公开（公告）日： | 2022-03-01 |
| 发明（设计）人： | 郜娜;韩孜新颖;丁颖;赵田园;李运超 | 申请（专利权）人： | 郑州大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/53;C12N15/867;C12Q1/02;C12R1/91 |
| 代理公司： | 北京元周律知识产权代理有限公司 11540 | 代理人： | 罗丽莲 |
| 地址： | 450001 河南省郑*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 细胞株 hsct6 radhi 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种重组细胞株HSCT6-rADHI，其特征在于，所述重组细胞株HSCT6-rADHI通过在受体细胞株HSC-T6中导入乙醇脱氢酶I基因得到。
2.根据权利要求1所述的重组细胞株HSCT6-rADHI，其特征在于，所述乙醇脱氢酶I基因来源于大鼠；
优选地，所述乙醇脱氢酶I基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
3.根据权利要求1所述的重组细胞株HSCT6-rADHI，其特征在于，所述重组细胞株HSCT6-rADHI与受体细胞株HSC-T6相比，乙醇脱氢酶I的基因表达量增加；
优选地，所述重组细胞株HSCT6-rADHI中乙醇脱氢酶I的基因表达量是受体细胞株HSC-T6的2倍以上。
4.根据权利要求1所述的重组细胞株HSCT6-rADHI，其特征在于，所述重组细胞株HSCT6-rADHI与受体细胞株HSC-T6相比，增殖能力、迁移能力、粘附能力中的至少一种增强；
优选地，所述重组细胞株HSCT6-rADHI与受体细胞株HSC-T6相比，HSC活化相关因子表达量增加；
优选地，所述HSC活化相关因子包括COL1A1、α-SMA中的至少一种。
5.根据权利要求1～4任一项所述的重组细胞株HSCT6-rADHI的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：
将乙醇脱氢酶I基因导入受体细胞株HSC-T6中，得到所述重组细胞株HSCT6-rADHI。
6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：
(S1)将乙醇脱氢酶I基因插入慢病毒载体，得到重组慢病毒质粒；
(S2)将重组慢病毒质粒和辅助质粒共转染293T细胞，得到LV-ADHI重组慢病毒；
(S3)LV-ADHI重组慢病毒感染受体细胞株HSC-T6，得到所述重组细胞株HSCT6-rADHI。
7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，(S1)中，所述插入为利用引物P1和引物P2将乙醇脱氢酶I基因插入慢病毒载体；
所述引物P1的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；
所述引物P2的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。
8.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，(S1)中，所述慢病毒载体为pFU-GW-012；
优选地，(S3)中，所述LV-ADHI重组慢病毒感染受体细胞株HSC-T6后，还包括利用含嘌呤霉素培养基对感染细胞株进行筛选；
所述含嘌呤霉素培养基中嘌呤霉素的浓度为1.0～4.0μg/ml。
9.权利要求1～4任意一项所述的重组细胞株HSCT6-rADHI或根据5～8任意一项所述构建方法构建得到的重组细胞株HSCT6-rADHI在肝病研究中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述肝病研究为ADHI参与肝纤维化的机制的研究。
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