[发明专利]一种重组细胞株HSCT6-rADHI及其构建方法与应用

说明书

本申请提供了一种重组细胞株HSCT6‑rADHI及其构建方法与应用。所述重组细胞株HSCT6‑rADHI通过在受体细胞株HSC‑T6中导入乙醇脱氢酶I基因得到，并发现HSC高表达ADHI后，能明显影响细胞的增值、侵袭和迁移能力。所述重组细胞株HSCT6‑rADHI可以高效地表达ADHI，可作为基础的试验材料和模型细胞株，可用于探索肝纤维化的发生机制，寻找肝纤维化新的缓解措施，逆转或阻断肝纤维化进程，寻找肝纤维化的易感因素，有利于肝纤维化的预防和进一步的靶向治疗，意义重大。

技术领域

本发明属于细胞生物学技术领域，具体涉及一种重组细胞株HSCT6-rADHI及其构建方法与应用。

背景技术

目前，全球范围内肝脏疾病患者超过13亿，是世界疾病负担和死亡的重要原因之一。在我国，病毒性肝炎、非酒精性脂肪性肝病及酒精性脂肪性肝病患者约占全世界1/3以上。10％-15％的慢性肝病患者在5-10年后会发生肝纤维化，并进一步发展为肝硬化甚至肝癌。肝纤维化是肝内细胞外基质(ECM)因合成增加、降解相对不足而在肝内异常沉积，导致肝脏结构和功能发生异常改变的一种可逆性病理变化。若其进一步发展成肝硬化及肝癌等疾病则难以逆转，所以阐明肝纤维化发生机制，逆转或阻断肝纤维化进程，寻找肝纤维化发生的易感因素有利于肝纤维化的预防和进一步的靶向治疗。

近年来，越来越多的证据显示视黄醇的代谢物视黄酸(RA)参与肝纤维化的进程。无论是在酒精还是非酒精如四氯化碳及硫代乙酰胺诱导的肝纤维化动物模型中，均发现了较高水平的RA。且有研究发现，RA对机体的毒性呈剂量依赖性，RA量越大，促纤维化作用越明显。

视黄醇在体内转变为RA的主要酶系为乙醇脱氢酶(ADHs)，人体内ADHs同工酶根据动力学特征及氨基酸序列等可分为五大类，七种酶，参与视黄醇代谢的亚型包括乙醇脱氢酶I(ADHI)、乙醇脱氢酶III(ADHIII)及乙醇脱氢酶IV(ADHIV)。其中ADHI和ADHIV的表达具有组织特异性，分别仅在肝脏和胃表达，而ADHIII在机体全身组织均有表达。肝脏中ADHI的表达及对视黄醇的代谢活性均显著高于ADHIII。提示，肝脏中参与视黄醇代谢为RA的ADHs亚型主要为乙醇ADHI。目前，前期结果表明，在正常人肝和纤维化肝脏中，肝纤维化组织中ADHI活性显著高于正常组织约3倍之多；在大鼠体内，ADHs天然活性越高，大鼠肝纤维化越明显；应用ADHs抑制剂4-MP后，小鼠纤维化面积明显降低。但是ADHI参与肝纤维化的机制尚不清楚。

发明内容

根据本申请的一个方面，提供一种重组细胞株HSCT6-rADHI，稳定高表达ADHI，可用于探索肝纤维化的发生机制，寻找肝纤维化新的缓解措施，逆转或阻断肝纤维化进程，寻找肝纤维化的易感因素，有利于肝纤维化的预防和进一步的靶向治疗。

一种重组细胞株HSCT6-rADHI，所述重组细胞株HSCT6-rADHI通过在受体细胞株HSC-T6中导入乙醇脱氢酶I基因得到。

可选地，所述乙醇脱氢酶I基因来源于大鼠。

可选地，所述乙醇脱氢酶I基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

可选地，所述重组细胞株HSCT6-rADHI与受体细胞株HSC-T6相比，乙醇脱氢酶I的基因表达量增加。

可选地，所述重组细胞株HSCT6-rADHI中乙醇脱氢酶I的基因表达量是受体细胞株HSC-T6的2倍以上。

可选地，所述重组细胞株HSCT6-rADHI与受体细胞株HSC-T6相比，增殖能力、迁移能力、粘附能力中的至少一种增强。

可选地，所述重组细胞株HSCT6-rADHI与受体细胞株HSC-T6相比，HSC活化相关因子表达量增加。

可选地，所述HSC活化相关因子包括COL1A1、α-SMA中的至少一种。