[发明专利]一种鞘磷脂酶的冻干保护剂及制备方法

权利要求书

1.鞘磷脂酶的冻干保护剂，其特征在于，包含以下组分：

蔗糖2~3 g/L， 海藻糖1~4 g/L， D-甘露醇2~5 g/L， 甘氨酸1~4 g/L，吐温20 0.02%~0.05%（v/v）， Mg²⁺ 5mM~10mM。

2.根据权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于，所述Mg²⁺由镁盐提供；所述镁盐包括氯化镁、硝酸镁、硫酸镁中的一种或几种复配。

3.根据权利要求1或2所述的冻干保护剂，其特征在于，还含有酸碱调节剂；所述酸碱调节剂包括柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲剂、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲剂、Tris-盐酸缓冲剂、PIPES缓冲剂、HEPES缓冲剂、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲剂或磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲剂。

4.根据权利要求3所述的冻干保护剂，其特征在于，所述酸碱调节剂的浓度为10~100mM，缓冲能力在pH 6.0~8.0之间。

5.权利要求1~4任一所述的冻干保护剂在制备鞘磷脂酶冻干粉和/或延长鞘磷脂酶制剂储存稳定期中的应用，其特征在于，所述鞘磷脂酶是来源于金黄色葡萄球菌的依赖 Mg²⁺的中性鞘磷脂酶。

6.一种制备鞘磷脂酶冻干粉的方法，其特征在于，所述鞘磷脂酶是来源于金黄色葡萄球菌的依赖 Mg²⁺的中性鞘磷脂酶；所述方法包括如下步骤：

（1）配制鞘磷脂酶和冻干保护剂的混合体系，使混合体系中鞘磷脂酶浓度为1~40mg/mL，冻干保护剂中各组分在混合体系中的浓度为：蔗糖2~3 g/L， 海藻糖1~4 g/L， D-甘露醇2~5 g/L， 甘氨酸1~4 g/L，吐温20 0.2~0.5 mL/L， Mg²⁺ 5mM~10mM；

（2）将步骤（1）配制的混合物冻干。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）的鞘磷脂酶是经过了粗分离和/或柱层析后的酶液。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）的冻干采用真空冷冻干燥。

9.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述鞘磷脂酶是利用基因工程手段表达获得或者是从野生菌中分离提取获得的。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述鞘磷脂酶是利用基因工程手段表达获得或者是从野生菌中分离提取获得的。

11.应用权利要求6~10任一所述方法制备的鞘磷脂酶冻干粉。