[发明专利]一种采用LC-MS法检测血浆中醋酸优力司特及其代谢物的方法

说明书

本发明公开了一种采用LC‑MS法检测血浆中醋酸优力司特及其活性代谢物单去甲基‑醋酸优力司特的方法，该方法用二氯甲烷/异丙醇对血浆样品进行萃取、进样LC‑MS/MS检测。该方法能检测醋酸优力司特，还能检测其活性代谢物单去甲基‑醋酸优力司特，同时具有快速、高灵敏，使用少量血浆就能同时监测两个组分的特点，可以应用于醋酸优力司特以及活性代谢物单去甲基‑醋酸优力司特的药代动力学与生物等效性研究。

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种液相色谱-串联质谱法检测血浆中醋酸优力司特以及活性代谢物单去甲基-醋酸优力司特的方法。

背景技术

醋酸优力司特(Ulipristal acetate,UPA)(11β)-17α-(乙酰氧基)-11-[4-(二甲基氨基)苯基]-19-去甲孕甾-4,9-二烯-3,20-二酮，是一种选择性的孕激素受体调节剂，具有甾体结构。在美国和其他国家的药品被批准为紧急避孕药。在欧洲也是如此已批准用于治疗子宫肌瘤，该药物已进入临床卵巢癌和乳腺癌的治疗进展。UPA有很多潜在的应用目前正在评估，研究一个经过充分验证的且适用性高的分析方法是势在必行的。

现有技术Journal of Chromatography B，1059(2017)43-48)公开一种采用LC-MS检测血浆中醋酸优力司特的方法，采用0.1％的甲酸水溶液作为流动相A，0.1％甲酸乙腈溶液作为流动相B，采用总时间为7分钟的梯度洗脱。0.25ml空白人血清或患者血清样品用于UPA的方法开发和定量。将浓度为10ng/mL的内标加入标准品QCs中和样品，旋转并用6毫升己烷：二氯甲烷(60:40v/v)萃取。混合物旋转10分钟，2000rpm离心10分钟，冷冻水层在液氮浴中。收集有机层，并进行处理在氮气流下蒸发。提取物被重新悬浮在空气中1毫升二氯甲烷，旋转，转移至LCMS小瓶中，干燥在氮气下，用100微升的30％甲醇(含有0.1％甲酸,)重新复溶注入LC-MS仪中检测。但是该方法血浆用量大，仅能检测醋酸优力司特，不能检测同时其活性代谢物单去甲基-醋酸优力司特，且检测时间较长。因此，有必要开发一种快速灵敏的LC-MS/MS方法，可同时检测醋酸优力司特及其活性代谢物单去甲基-醋酸优力司特。

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)检测血浆样品醋酸优力司特及其代谢物的方法。该方法仅用少量血浆不但可以检测醋酸优力司特(简称“UPA”)的含量，而且还可以同时检测UPA的活性代谢物单去甲基-醋酸优力司特(Dme-UPA)的含量，并根据“生物样品定量分析验证指仅能导原则”进行验证。本文中的HPLC-MS/MS也称“LC-MS或LC-MS/MS”。

为实现本发明的目的，提供如下实施方案。

本发明提供一种采用LC-MS法检测血浆中醋酸优力司特及其代谢物的方法，所述代谢物为单去甲基-醋酸优力司特，该方法包括以下步骤：

(1)取血浆样品用二氯甲烷/异丙醇进行萃取处理；

(2)将萃取得到的样品挥干，用乙腈/水混合溶剂复溶后注入LC-MS/MS仪检测，

其中，色谱柱为C18硅胶柱，0.1％甲酸水溶液为流动相A，0.01％甲酸乙腈溶液为流动相B，采用梯度洗脱法，采用梯度洗脱法，其中，其梯度变化如下：

在一些实施方案中，上述本发明的方法，步骤1)中所述萃取包括：取血浆样品，加入萃取溶剂二氯甲烷/异丙醇，振摇、离心，取上清液，在氮气下蒸发至干燥即得样品。

优选的，上述本发明的方法，步骤1)中所述萃取包括，血浆样品与萃取溶剂混合后，振摇10min，4000rpm离心5分钟，取上清液在氮气下蒸发，蒸发温度为45℃，干燥残留品。

优选的，上述本发明的方法，步骤1)中，血浆样品与萃取溶剂的体积比为1：30，所述萃取溶剂，二氯甲烷与异丙醇的体积比为90/10。