[发明专利]一种提高乌菜小孢子出胚率的方法

权利要求书

1.一种提高乌菜小孢子出胚率的方法，其特征在于，包括如下具体步骤：

(1)于抽薹开花期，在乌菜植株的花蕾上喷施0.1mg/L芸薹素内酯BR，并在喷施处理24h后采摘相应的花蕾样本，用于后续小孢子培养；

(2)将采摘的花蕾样本置于4℃环境下预冷处理1d；

(3)预冷处理后，挑选单核靠边期的花蕾样本，并先后采用70％酒精消毒30s、0.1％的HgCI摇晃消毒6min，最后再采用无菌水冲洗3次，每次5min；接着，在玻璃杯中加入B5培养基，并用玻璃棒研碎花蕾以释放出小孢子；然后，用钢丝网筛将玻璃杯中的小孢子溶液过滤到新的灭菌玻璃杯中，再用细胞网筛二次过滤到离心管，离心处理；最后，用B5培养基重悬离心沉淀，并再次离心，最终获得的沉淀即为目标所需的纯化小孢子；

(4)用NLN培养基重悬步骤(3)得到的纯化小孢子，并在其中添加浓度为150mg/L的聚乙烯吡咯烷酮PVP；

(5)将步骤(4)的培养物于33℃温度下热激处理24h后转至25℃下黑暗培养；待出现肉眼可见的胚状体后，将其置于摇床上25℃振荡培养。

2.根据权利要求1所述的提高乌菜小孢子出胚率的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，钢丝网筛为300目，细胞网筛为40um。

3.根据权利要求1所述的提高乌菜小孢子出胚率的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，两次离心处理的离心转速分别为1000r/min。

4.根据权利要求1所述的提高乌菜小孢子出胚率的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，纯化小孢子通过NLN培养基重悬稀释以调整密度；待小孢子密度达1×10⁵～5×10⁵个/mL时，将其分装到培养皿，并在每个培养皿中分别添加相应浓度的聚乙烯吡咯烷酮。

5.根据权利要求1所述的提高乌菜小孢子出胚率的方法，其特征在于，所述步骤(5)中，待出现肉眼可见的胚状体后，将培养物置于摇床上25℃振荡培养，震荡转速为50r/min。