[发明专利]一种用于检测人BP180 IgG抗体的ELISA试剂盒及其应用

权利要求书

1.用于检测人BP180 IgG抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中含有BP180微孔条带，所述的BP180微孔条带中分别包被有SEQ ID NO.1-29所示的多肽或是所述多肽的混合物。

2.如权利要求1所示的ELISA试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还含有标准血清1、标准血清2、酶标抗体、稀释液、反应缓冲液、清洗缓冲液、酶基质液以及终止液。

3.如权利要求1所示的ELISA试剂盒，其特征在于，所述的标准血清1为含0.05％w/v叠氮钠的反应缓冲液；所述的标准血清2为含有100U/ml的BP180IgG抗体以及0.05％w/v叠氮钠的反应缓冲液；所述的酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的兔抗人IgG抗体；所述的反应缓冲液为含0.05％v/v Tween20和0.05％w/vNaN3的1xPBS，所述的清洗缓冲液为含0.5％v/vTween20的10xPBS；所述的酶基质液为TMB显色液；所述的终止液为0.5N盐酸溶液。

4.如权利要求1所示的ELISA试剂盒，其特征在于，所述的含有BP180微孔条带通过以下方法制备得到：

1)将SEQ ID NO.1-29所示的多肽分别用PBS溶解，得到储存浓度为4mg/ml的多肽溶液，所有溶解后的多肽等体积混合，获得4mg/ml的多肽混合物，包被前使用PBS进行1000倍稀释，使得多肽混合物的终浓度达到4μg/ml；取96孔板进行抗原多肽的包被，每孔加入多肽混合物100μl，4℃进行包被12-16h；或

2)将SEQ ID NO.1-29所示的多肽分别用PBS溶解，得到储存浓度为4mg/ml的多肽溶液，包被前分别使用PBS进行1000倍稀释，使得多肽的终浓度达到4μg/ml；取96孔板进行抗原多肽的包被，每孔分别加入一种多肽溶液100μl，4℃进行包被12-16h。

5.如权利要求1所示的ELISA试剂盒，其特征在于，所述的用于检测人BP180 IgG抗体时，按照以下步骤进行：

(1)试剂准备

实验前，将所有检测材料置于室温下，根据需要用蒸馏水稀释适量的清洗缓冲液；

(2)样本准备

1:50稀释每个患者血清：10μl血清加500μl反应缓冲液，混匀；

(3)检测步骤

1)微孔条带加入100μl稀释后样本，室温下孵育60分钟；

2)洗涤微孔条带：使用200μl/孔稀释后的清洗缓冲液，洗涤4次；

3)加入100μl/孔酶标记抗体液，室温下孵育45分钟；

4)洗涤微孔条带：使用200μl/孔稀释后的清洗缓冲液，洗涤4次；

5)加入100μl/孔酶基质液，室温下孵育30分钟；

6)加入100μl/孔终止液；

7)读取450nm下的吸光度；

8)结果计算和判定

单位值(U/ml)计算公式：

(A₄₅₀样品-A₄₅₀标准血清1)*100/(A₄₅₀标准血清2-A₄₅₀标准血清1)

判定标准：单位值20为阴性；单位值≥20为阳性；

质量控制：每个检测结果必须符合下列条件，否则结果无效：

标准血清1的OD450小于等于0.100

标准血清2的OD450大于等于0.500。

6.权利要求1-5任一项所述的ELISA试剂盒在制备检测人BP180 IgG抗体的试剂中的用途。

7.权利要求1-5任一项所述的ELISA试剂盒在制备检测人大疱性类天疱疮和BP180型黏膜类天疱疮的试剂中的用途。