[发明专利]一种用于检测人BP180 IgG抗体的ELISA试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种用于检测人BP180IgG抗体的ELISA试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有BP180微孔条带，所述的BP180微孔条带中分别包被有SEQ ID NO.1‑29所示的多肽或所述多肽的混合物。优选的，所述的试剂盒中还含有标准血清1和2、酶标抗体、稀释液、反应缓冲液、清洗缓冲液、酶基质液以及终止液。本发明利用多个抗原多肽来替代长片段的完整蛋白作为ELISA的包被蛋白，在充分保障了抗体识别的抗原表位的同时，节约了大量的成本，且相对于NC16a重组蛋白而言，敏感性会更高。本发明利用ELISA方法检测人BP180IgG抗体，相对于现有的免疫印迹法，更容易应用于临床对大疱性类天疱疮和BP180型黏膜类天疱疮的诊断。

技术领域

本发明涉及一种ELISA试剂盒及其应用，特别涉及一种用于检测人BP180IgG抗体的ELISA试剂盒及其应用。本发明属于医药技术领域。

背景技术

大疱性类天疱疮(Bullous pemphigoid，BP)和BP180型黏膜类天疱疮(anti-BP180-type MMP)，均属于人皮肤自身免疫性水疱病，是一类主要影响老年人的皮肤自身免疫性水疱病。两者的相似之处就是都需要检测到抗BP180的IgG自身抗体才能进行诊断，区别主要是在临床特点上，大疱性类天疱疮患者只有皮肤损伤，而BP180型黏膜类天疱疮可以表现为皮肤和黏膜的损伤，或者只有黏膜损伤。

现有的检测人BP180的IgG自身抗体的方法主要是免疫印迹法和ELISA法两种。免疫印迹法主要使用的是表皮抽提物或者BP180的重组蛋白作为抗原。表皮抽提物的制备过程非常复杂，目前全世界也只有非常专业的实验室才能制备，重组蛋白获得较容易，但是费用较高，最关键的问题是免疫印迹的方法比较复杂，不适宜在临床进行广泛应用。

ELISA法目前应用比较广泛，因为有至少2家公司提供商品化的ELISA试剂盒，可以在临床应该用进行BP180自身抗体的检测。但目前的ELISA法检测BP180的抗体都是识别BP180胞外区的一小段区域(NC16a)，这个区域被认为是大疱性类天疱疮患者血清中的自身抗体主要识别的区域。但是，文献已经报道，BP180型黏膜类天疱疮患者的血清中的自身抗体主要识别的是BP180的C-terminal，虽然也是胞外区，但不是NC16a这一段。此外，本发明发明人近期发现，一些BP和anti-BP180 MMP患者体内还存在着识别BP180胞内区的抗体。因此，目前商品化识别BP180 NC16a的BP180 IgG抗体检测试剂盒明显不能满足临床BP和anti-BP180 MMP的诊断需求。

有鉴于此，本发明提出了一种新型的BP180 IgG抗体检测ELISA试剂盒，该试剂盒能够对识别BP180全长的任何抗原表位的抗体进行检测，提高了自身抗体的检出率，进而提高了临床上对大疱性类天疱疮和BP180型黏膜类天疱疮的诊断的准确性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测人BP180 IgG抗体的ELISA试剂盒及其应用。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明的一种用于检测人BP180 IgG抗体的ELISA试剂盒，所述的试剂盒中含有BP180微孔条带，所述的BP180微孔条带中分别包被有SEQ ID NO.1-29所示的多肽或所述多肽的混合物。

其中，优选的，所述的试剂盒中还含有标准血清1、标准血清2、酶标抗体、稀释液、反应缓冲液、清洗缓冲液、酶基质液以及终止液。

其中，优选的，所述的标准血清1为含0.05％w/v叠氮钠的反应缓冲液；所述的标准血清2为含有100U/ml的BP180 IgG抗体以及0.05％w/v叠氮钠的反应缓冲液；所述的酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的兔抗人IgG抗体；所述的反应缓冲液为含0.05％v/v Tween20和0.05％w/v NaN3的1xPBS，所述的清洗缓冲液为含0.5％v/v Tween20的10xPBS；所述的酶基质液为TMB显色液；所述的终止液为0.5N盐酸溶液。