[发明专利]低ADCC/CDC功能性单抗及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种降低或去除IgG1亚型抗体的ADCC/CDC功能的方法，其特征在于，在原始IgG1亚型抗体重链的恒定区插入一段柔性氨基酸序列。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在原始IgG1亚型抗体重链的CDR3与CH2区之间插入一段柔性氨基酸序列；

所述插入一段柔性氨基酸序列，阻断了抗体可变区结合抗原后产生的机械应力传递，使抗体重链恒定区与Fc受体和/或补体结合位点不能充分暴露出来，弱化抗体与NK细胞、巨噬细胞和中性粒细胞表达IgG Fc受体的杀伤细胞结合或和补体结合，无法或降低诱导ADCC和CDC的信号；

所述柔性氨基酸序列由侧链较小的氨基酸组成的一段连接多肽，用于防止或降低其两端的结构域之间在空间构象上的相互干扰，其序列包括但不限于GGSGGS、GSGGSGG、GSGGSGGG、GGGGSGGG、GSGSG、GGSGG、GGS、GGSGS和GGGS。

3.如权利要求1-2任一所述的方法，其特征在于，所述原始IgG1亚型抗体为TNF-α、PCSK9、NGF、C5、Aβ、IL-6、IL-17A、IL23A、HGF、CMET、Notch1、CCL11、IL6R、IL-31R、IL-1B、IL-20、CD40、CD47、DKK1/2、TIGIT、4-1BB、IGF-1R、LL4、PDGFR2、HER3、IGF1/2、RANKL、sclerostin、GCGR、CGRP、ANGPTL3、IL-13、IL-4R、CSF-1R、TFPI、FCGRT、CD47抗体，优选Eculizumab单抗、Evolocumab单抗、Erenumab单抗、Fulranumab单抗、Crenezumab单抗、Brodalumab单抗、Ixekizumab单抗、Satralizumab单抗、Gevokizumab单抗、Denosumab单抗、Blosozumab单抗、Crotedumab单抗、Fasinumab单抗、Fremanezumab单抗、Evinacumab单抗、Lebrikizumab单抗、Dupilumab单抗、Cabiralizumab单抗、Concizumab单抗、Rozanolixizumab单抗、Magrolimab单抗或上述抗体药的IgG1亚型的改进型单抗。

4.一种低ADCC/CDC功能性抗体，其特征在于，是由权利要求1-3任一所述方法制备的抗体。

5.权利要求4所述的低ADCC/CDC功能性抗体，其特征在于，所述抗体为嵌合单抗、人源化单抗、全人源单抗、双特异抗体或融合蛋白；

所述抗体是在原始IgG1亚型抗体重链的CDR3与CH2区之间插入一段柔性氨基酸序列得到，所述柔性氨基酸序列由侧链较小的氨基酸组成的一段连接多肽，用于防止或降低其两端的结构域之间在空间构象上的相互干扰，其序列包括但不限于GGSGGS、GSGGSGG、GSGGSGGG、GGGGSGGG、GSGSG、GGSGG、GGS、GGSGS和GGGS在降低或去除IgG1亚型抗体的ADCC/CDC功能中的应用；

所述柔性氨基酸序列插入位点包括但不限于GG(138/139)、SS(177/178)、SG(178/179)、SS(184/185)、SSS(191/192/193)、LL(235/236)、GG(237/238)。

6.权利要求4或5所述的低ADCC/CDC功能性抗体在制备治疗以其相应抗原为靶标的疾病药物中的应用。

7.一种低ADCC/CDC功能的抗VEGF单抗，其特征在于，在原始贝伐单抗重链的恒定区插入一段柔性氨基酸序列，切断抗体可变区结合抗原后产生的机械应力传递，使单抗重链恒定区与Fc受体和/或补体结合位点不能充分暴露出来，弱化单抗与NK细胞、巨噬细胞和中性粒细胞表达IgG Fc受体的杀伤细胞结合或和补体结合，无法或降低诱导ADCC和CDC的信号。

8.权利要求7所述的低ADCC/CDC功能性抗VEGF单抗的以下任一应用：

(1)在制备治疗以VEGF为靶标的疾病药物中的应用；

(2)在制备治疗湿性黄斑药物中的应用。