[发明专利]动态交联水凝胶培养细胞的应用

权利要求书

1.一种动态交联水凝胶在体外培养细胞中的应用，所述动态交联水凝胶，是由明胶和交联基团修饰的环糊精混合形成的水凝胶预聚体，混入细胞后，在交联引发剂或光照的作用下发生交联反应得到的动态交联水凝胶；其中所述细胞为胚胎干细胞或免疫细胞。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，在使用所述动态交联水凝胶培养胚胎干细胞的过程中无需使用饲养层细胞或分化抑制剂，而获得保持多能性的胚胎干细胞；优选地，所述胚胎干细胞可在不少于60天内保持增殖且获得的细胞克隆保持多能性。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述免疫细胞选自T细胞、NK细胞、DC细胞或CIK细胞中的一种或多种。

4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述体外培养细胞包括将负载细胞的动态交联水凝胶加入基础培养基进行培养；优选地，所述基础培养基选自MEM、F12、RPMI 1640、DMEM、MEM/F12、DEME/F12培养基中的一种。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，交联基团修饰的环糊精为丙烯酸酯化环糊精，所述丙烯酸酯化环糊精中丙烯酸酯基团与环糊精的摩尔比为0.8-1.8。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述水凝胶预聚体中明胶的固含量为1-20％(w/v)，丙烯酸酯化环糊精的固含量为1-20％(w/v)。

7.一种体外三维培养细胞的方法，包括如下步骤：

1)将明胶和交联基团修饰的环糊精混合形成水凝胶预聚体，并混入细胞，在化学交联引发剂或光引发剂、光照条件下引发交联反应得到负载细胞的动态交联水凝胶；

2)将所述负载细胞的动态交联水凝胶在基础细胞培养基中培养；

其特征在于，所述细胞为胚胎干细胞或免疫细胞；在使用所述动态交联水凝胶培养胚胎干细胞的过程中无需使用饲养层细胞或分化抑制剂，而获得保持多能性的胚胎干细胞；优选地，所述胚胎干细胞可在不少于60天内保持增殖且获得的细胞克隆保持多能性。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，在步骤2)后进一步包括向培养后的动态交联水凝胶中加入胶原酶、金刚烷、叔丁基苯、布洛芬、香叶醇、薄荷醇、油酸中的一种或数种，降解所述动态交联水凝胶，回收培养的细胞团簇。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述负载细胞的动态交联水凝胶可不经回收细胞，将所述动态交联水凝胶直接注射于体内后可降解。

10.一种动态交联水凝胶在制备治疗药剂中的应用，其特征在于，将根据权利要求7所述的方法获得的负载细胞的动态交联水凝胶注射或填充于患者体内待治疗的部位，实现递送作用，优选地，所述动态交联水凝胶还负载有治疗药物。