[发明专利]一种基于洗脱-挤出模式的逆流色谱连续进样分离方法

权利要求书

1.一种基于洗脱-挤出模式的逆流色谱连续进样分离方法，其特征在于，该连续进样分离方法包含以下的步骤：

1）将用于配制逆流色谱分离的两相溶剂系统的原料加入分液漏斗中，振摇混合，静置分层，得到用于分离的两相溶剂系统，以其中一相作为固定相，另一相作为原始流动相；将原始流动相分为两部分；

2）将样品溶解于一部分原始流动相中，配成样品溶液，另一部分原始流动相为流动相；

3）将固定相泵入逆流色谱分离柱，当固定相充满逆流色谱分离柱后，启动逆流色谱仪，并设定逆流色谱仪的转速；当逆流色谱仪实际转速达到预设转速且稳定后，将步骤2）中的流动相泵入逆流色谱分离柱中；待逆流色谱柱内达到两相平衡后，通过恒流泵持续泵入样品溶液，连续进样一段时间后，停止泵入样品溶液，再泵入流动相，继续洗脱目标化合物一段时间后，停止泵入流动相，再将固定相泵入逆流色谱柱内，根据检测结果，收集目标化合物馏分；

4）真空干燥目标化合物馏分，得到分离的样品。

2.如权利要求1所述基于洗脱-挤出模式的逆流色谱连续进样分离方法，其特征在于：所述步骤1）中，配制逆流色谱分离的两相溶剂系统的原料为正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水。

3.如权利要求2所述基于洗脱-挤出模式的逆流色谱连续进样分离方法，其特征在于：正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为2︰3︰2︰3。

4.如权利要求1所述基于洗脱-挤出模式的逆流色谱连续进样分离方法，其特征在于：所述步骤3）中，连续泵入样品溶液的时间T_inj按下式计算：

T_inj=[(K_D2－K_D1)V_S/F]－(0.5W_b1+0.5W_b2) （1）

（1）式中，K_D2和K_D1分别是化合物2和化合物1的分配系数（K_D2K_D1），V_S是逆流色谱柱内固定相体积，F是流动相流速，W_b1和W_b2分别为组成样品的化合物1和化合物2的洗脱色谱峰宽度；

为避免分离时不同化合物之间交叉，实际进样时间根据分离情况短于计算得到的T_inj数值。

5.如权利要求1所述基于洗脱-挤出模式的逆流色谱连续进样分离方法，其特征在于：所述步骤3）中，固定相泵入逆流色谱分离柱的流速为1~100 mL/min。

6.如权利要求1所述基于洗脱-挤出模式的逆流色谱连续进样分离方法，其特征在于：所述步骤3）中，设定逆流色谱仪的转速为200~1600 rpm。