[发明专利]一种基于洗脱-挤出模式的逆流色谱连续进样分离方法

说明书

本发明公开了一种基于洗脱‑挤出模式的逆流色谱连续进样分离方法。采用逆流色谱中洗脱‑挤出模式，以逆流色谱两相溶剂中流动相溶解样品，实现样品的连续进样。本方法主要用于两种化合物的分离，可以在洗脱过程中分离得到一个化合物，挤出过程分离得到另一个化合物。本发明的制备方法利用逆流色谱中洗脱‑挤出模式实现了真正意义的连续进样，较传统方法大幅度提高了进样量，可以降低溶剂消耗、提高制备量。

技术领域

本发明属于天然产物分离方法技术领域，涉及一种逆流色谱连续进样分离的方法，尤其涉及一种基于洗脱-挤出模式的逆流色谱连续进样分离方法。

背景技术

逆流色谱（Counter-current Chromatography）是一种基于液-液分配原理的色谱分离技术，它主要利用目标化合物在互不相溶的两相溶剂之间分配系数的差异来实现分离。由于采用液体的固定相和流动相，因此具有无由固体固定相引起的不可逆吸附、进样量大、样品前处理简单等优点，在天然产物分离领域得到了广泛的应用。

洗脱-挤出模式（Elution-ExtrusionMode）是逆流色谱中独特的一种洗脱模式，它充分利用了逆流色谱液体固定相和流动相的特点，在应用洗脱-挤出模式时，保留较小的化合物在洗脱过程中根据分配系数大小被流动相依次洗脱出来；在洗脱过程结束后，保留较强的化合物仍然分布在固定相中，此时转为挤出模式，将流动相换为固定相，将保留在固定相中的化合物推出。洗脱-挤出模式最初主要用来在逆流色谱中分离极性范围跨度比较大的化合物，可以减少分离时间，降低溶剂消耗。但是，现有的洗脱-挤出模式不能同时分离两个目标化合物。

发明内容

本发明针对现有逆流色谱分离方面的需求，提供一种能同时分离两个目标化合物的基于洗脱-挤出模式的逆流色谱连续进样分离方法

为此，本发明采用的技术方案是：一种基于洗脱-挤出模式的逆流色谱连续进样分离方法，主要包括以下步骤：

步骤1：配制用于逆流色谱分离的溶剂系统，以其中一相作为固定相，另一相作为原始流动相；

将原始流动相分为两部分，在其中一部分原始流动相中完全溶解由不同化合物混合组成的样品，制成样品溶液；另一部分原始流动相为流动相；

样品由化合物1和化合物2组成。

步骤2：将固定相泵入逆流色谱仪中，待固定相充满逆流色谱分离柱后启动逆流色谱仪，当逆流色谱仪达到预设转速且稳定后，将流动相泵入逆流色谱分离柱；当逆流色谱分离柱内达到两相平衡后，停止泵入流动相，通过恒流泵泵入样品溶液，当泵入样品溶液的持续时间达到预定时间后，停止泵入样品溶液，再泵入流动相继续洗脱目标化合物，持续洗脱一段时间后；在保持流速不变的前提下，将流动相改为固定相，开始挤出过程；根据检测色谱图，收集分离馏分，减压真空干燥后得到组成样品的各组分。

连续泵入样品溶液的时间T_inj按以下公式计算：

T_inj=[(K_D2－K_D1)V_S/F]－(0.5W_b1+0.5W_b2)（1）