[发明专利]同时检测对虾WSSV、IHHNV、EHP、SHIV多重荧光PCR检测试剂盒及方法

权利要求书

1.同时检测对虾WSSV、IHHNV、EHP、SHIV多重荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：包括冻干固态PCR Mix，液态复溶Buffer、冻干固态阴性对照和冻干固态阳性对照，所述冻干固态PCR Mix含有WSSV VP644基因、IHHNV NS2基因、EHP 18s基因和SHIV MCP基因对应的特异性引物探针序列组；

所述冻干固态PCR Mix含有WSSV上游引物序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物序列如SEQ ID NO:2所示，探针序列如SEQ ID NO:3所示；IHHNV上游引物序列如SEQ ID NO:4所示，下游引物序列如SEQ ID NO:5所示，探针序列如SEQ ID NO:6所示；EHP上游引物序列如SEQID NO:7所示，下游引物序列如SEQ ID NO:8所示，探针序列如SEQ ID NO:9所示；SHIV上游引物序列如SEQ ID NO:10所示，下游引物序列如SEQ ID NO:11所示，探针序列如SEQ IDNO:12所示；

具体核苷酸序列如下：

WSSV引物探针序列为：

上游引物SEQ ID NO:1：5’-CAATGGTCCCGTCCTCATCT-3’

下游引物SEQ ID NO:2：5’-AGCTGCCTTGCCGGAAA-3’

探针SEQ ID NO:3：5’-AGCCATGAAGAATGCCGTCTATCACACACT-3’；

IHHNV引物探针序列为：

上游引物SEQ ID NO:4：5’-CCATTACAGATCATGGTGACCACT-3’

下游引物SEQ ID NO:5：5’-GTAACTCCCAAATAGGCGAGG-3’

探针SEQ ID NO:6：5’-CGGACACCCAACCAATAAGACCAGA-3’；

EHP引物探针序列为：

上游引物SEQ ID NO:7：5’-GGGCAAAGAATGAAATCTCAAGA-3’

下游引物SEQ ID NO:8：5’-CCCAGATACGTCTAAGAGCATCG-3’

探针SEQ ID NO:9：5’-CACCTGGACCAACGGAGGCGAA-3’；

SHIV引物探针序列为：

上游引物SEQ ID NO:10：5’-TGGACCAAACATTTGGATTGG-3’

下游引物SEQ ID NO:11：5’-TTACGACATCAGGTTCCAGAGAAC-3’

探针SEQ ID NO:12：5’-TTCCTGACACCGAAGAAGAGAGCCTT-3’。

2.根据权利要求1所述的同时检测对虾WSSV、IHHNV、EHP、SHIV多重荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述冻干固态PCR Mix在冻干前全预混液包括以下组分：dATP、dGTP、dCTP、dUTP、DNA聚合酶、UDG酶、WSSV VP644基因F/R-P、IHHNV NS2基因F/R-P、EHP 18s基因F/R-P、SHIV MCP基因F/R/P、冻干复合保护剂。

3.根据权利要求2所述的同时检测对虾WSSV、IHHNV、EHP、SHIV多重荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述冻干复合保护剂的成分包括质量浓度为3-6％的海藻糖、质量浓度为0.01-0.1％的甘氨酸、质量浓度为0.1-1％的牛血清白蛋白、0.1-0.3％Proclin 300、0.1-1％甲酰胺。

4.根据权利要求1所述的同时检测对虾WSSV、IHHNV、EHP、SHIV多重荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述冻干固态PCR MIX在冻干前的全预混液中:WSSV VP644基因F/R-P浓度分别为200nM、200nM、100nM，IHHNV NS2基因F/R-P浓度分别为200nM、200nM、100nM，EHP 18s基因F/R-P浓度分别为400nM、400nM、200nM，SHIV MCP基因F/R-P浓度分别为100nM、100nM、50nM。