[发明专利]一种菠菜Y染色体特异的核苷酸探针及其应用

权利要求书

1.一种菠菜Y染色体特异的核苷酸探针，其特征在于：所述核苷酸探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。

2.根据权利要求1所述的菠菜Y染色体特异的核苷酸探针，其特征在于：所述核苷酸探针为荧光标记物标记的核苷酸探针，该核苷酸探针的末端标记荧光标记物。

3.根据权利要求1所述的菠菜Y染色体特异的核苷酸探针，其特征在于：所述核苷酸探针的5’末端用fluorescein或Alexa Fluor-488荧光基团或者Texas Red标记。

4.一种权利要求1-3中任意一项所述的菠菜Y染色体特异的核苷酸探针的制备方法，其特征在于具体步骤为：

步骤S1：根据菠菜雌性基因组和雄性基因组以spinach_repeat_v1.fa构建重复序列数据库，利用RepeatMasker软件对雄性特异区域YY_141330基因进行重复序列屏蔽，并从剩余的单拷贝序列中筛选出两段序列YY_141330_1和YY_141330_2，使用Oligo7对上述两段单拷贝序列设计引物，扩增出长度分别为1316bp、1726bp的核苷酸探针；

步骤S2：利用切口平移方法分别将两个核苷酸探针构建成荧光核苷酸探针，其5’末端用fluorescein或Alexa Fluor-488或者Texas Red荧光基团进行标记；

步骤S3：荧光核苷酸探针构建好后，逐步进行FISH实验验证探针的功能，等比例混合两个荧光核苷酸探针，对菠菜花药减数分裂分裂相、根尖有丝分裂分裂相进行杂交，以验证这种荧光核苷酸探针对菠菜Y染色体的特异性，确定正确的荧光核苷酸探针，该荧光核苷酸探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。

5.权利要求1-3中任意一项所述的菠菜Y染色体特异的核苷酸探针在检测菠菜Y染色体中的应用。

6.权利要求1-3中任意一项所述的菠菜Y染色体特异的核苷酸探针在检测菠菜野生种S. turkestanica Y染色体中的应用。

7.根据权利要求5所述的菠菜Y染色体特异的核苷酸探针在检测菠菜Y染色体中的应用，其特征在于具体过程为：首先进行菠菜花药减数分裂、根尖有丝分裂染色体制片，核苷酸探针构建，荧光原位杂交，荧光显微镜观察，如果菠菜根尖有丝分裂分裂相中包含Y染色体，则在Y染色体长臂靠近着丝粒位置产生强而清晰的杂交信号；如果菠菜根尖有丝分裂分裂相中不包含Y染色体，则不会产生任何杂交信号。