[发明专利]一种与酶共生增强炎症治疗的多肽自组装药物递送载体的制备方法

说明书

本发明公开了一种基于酶共生多肽自组装药物递送载体的制备方法，并研究了其在提高常规药物抗炎功效方面的作用。在4‑氨基脯氨酸五肽的侧链引入醌丙酸，合成了NQO1响应性多肽，将其与蛋白质配体功能化的衍生物共组装而制备了与酶共生的多肽自组装药物递送载体。多肽被NQO1还原后形成对Keap1具有高亲和力的纳米纤维，从而通过Nrf2途径上调NQO1的表达。上调的NQO1反过来促进多肽组装成纳米纤维，从而建立多肽组装与NQO1表达之间的共生关系。体外和体内研究均表明共生组装系统既能够缓解地塞米松的ROS副作用又下调促炎细胞因子来增强抗炎功效。

技术领域

本发明属于多肽纳米药物及递送载体技术领域，具体涉及一种与酶共生增强炎症治疗的多肽自组装药物递送载体的制备方法。

背景技术

通过外部或内部刺激在活细胞中可控地自组装赋予多肽纳米结构从疾病诊断到治疗的广泛生物学功能。由于酶在特定微环境下催化化学反应和选择性表达，酶被认为是调节多肽组装的一种通用策略。其中，包括碱性磷酸酶、硝基还原酶、caspase-3/7等多种酶已被用于调控活细胞中多肽自组装。然而，在大多数情况下，所使用的酶都是由细胞自然产生的，缺乏酶的表达与多肽组装之间的密切关联。这导致对特定细胞中酶的过度表达的强烈依赖，从而导致多肽的组装受到上述酶的限制，特别是在早期检测病理细胞和干扰其命运方面的挑战。

共生不仅是生物体间普遍存在的生物现象，也是活细胞间代谢、相互作用的潜在机制。例如，缺氧的肿瘤细胞和癌症相关的成纤维细胞将乳酸转运到含氧的肿瘤细胞，而含氧的肿瘤细胞将ATP重新提供给缺氧细胞以维持能量。此外，癌症相关成纤维细胞和癌细胞之间氨基酸的共生振荡在细胞增殖和癌症病理学中起着关键作用。这些过程启发我们建立酶的表达和多肽的组装之间的共生关系，其中它们密切的共生关联可能会在酶的表达正常的条件下加速活细胞中肽的自组装。NAD(P)H醌脱氢酶1(NQO1)是一种细胞质中黄素腺嘌呤二核苷酸依赖性还原酶，在抗氧化应激中具有抗氧化功能。NQO1的细胞内表达由蛋白质核因子红细胞相关因子2(Nrf2)调节，并且通常在肿瘤细胞中上调，从而应用于NQO1响应前药或药物递送。然而，在生物微环境的许多情况下，细胞中NQO1的表达水平并未上调，从而限制了NQO1响应系统用于疾病治疗。

发明内容

本发明目的是解决在生物微环境的细胞中NQO1的表达水平不高，从而限制了NQO1响应系统用于疾病治疗的问题，提供一种与酶共生增强炎症治疗的多肽自组装药物递送载体的制备方法。

本发明通过研究多肽组装与酶的表达之间的关系确认它们的共生关联，用于炎症相关疾病的有效治疗。该多肽自组装药物递送载体方法简单，反应条件温和，操作简便。

本发明的技术方案为：

一种与酶共生增强炎症治疗的多肽自组装药物递送载体的制备方法，所述多肽自组装药物递送载体为DEX@AmpFQB，制备步骤如下：

步骤1：多肽AmpFQ和AmpFQ-ETGE的合成；

1)将相对于Merrifield树脂2倍当量的Boc-Phe-OH、3倍当量的K₂CO₃和3倍当量的KI溶解于DMF中并加入含有Merrifield树脂的固相合成管，在60-80℃下摇动12-16小时，依次用95％乙醇、DMF和DCM洗涤树脂，利用DCM稀释的体积百分含量为30％的TFA脱掉Boc保护基团，从而使第一个氨基酸接到树脂上；

2)之后，通过常规的Fmoc固相合成法连接剩下的FFAmpF四个氨基酸，具体操作是，将相对于Merrifield树脂4倍当量的Fmoc保护的氨基酸、4倍当量的HATU和6倍当量的DIEA溶解于DMF中与接了第一个氨基酸的树脂反应1.5小时，用25％哌啶去除Fmoc保护基团；

3)在合成FFAmpFF之后，将N-末端Fmoc-保护基团保留在树脂上，用DCM稀释的50％TFA除去4-氨基脯氨酸的Boc-保护基团；