[发明专利]一种视网膜血管疾病模型的构建方法及其应用

说明书

本发明公开了一种视网膜血管疾病模型的构建方法及其应用，涉及视网膜血管疾病研究技术领域。本发明提供了一种视网膜血管疾病动物模型的构建方法，该方法通过抑制Lmbr1l基因的表达或使Lmbr1l基因不表达，可使动物体表现视网膜血管发育缓慢，密度降低，可以构建出具有视网膜血管生成缺陷表型的视网膜血管疾病动物模型，为本领域研究人员深入研究视网膜血管疾病发病机制，临床早期筛查以及筛选出可有效靶向治疗药物提供了模型基础。

技术领域

本发明涉及视网膜血管疾病研究技术领域，具体而言，涉及一种视网膜血管疾病模型的构建方法及其应用。

背景技术

血管发育对组织生长和内环境稳态至关重要，异常血管发育导致多种人类疾病。哺乳动物视网膜拥有一个组织良好的血管系统，以满足对氧气和营养物质的高需求，维持视网膜的正常功能。而视网膜血管功能障碍是导致视力下降的原因之一，因此，找到调控眼视网膜血管发育的新基因具有重要意义。

Norrin/β-catenin信号通路和多种视网膜血管疾病相关，包括湿性年龄相关性黄斑变性(AMD)，早产儿视网膜病变(ROP)，糖尿病视网膜病变(DR)和角膜新生血管。Norrin/β-catenin信号通路的异常激活和抑制都会导致视网膜血管发育异常，出现遗传性视网膜血管疾病，包括Norrin疾病，家族性渗出性玻璃体视网膜病变(FEVR)。现有研究表明，Norrin/β-catenin信号通路的精确调控对视网膜血管发育至关重要。

目前，针对视网膜血管疾病的诊断主要依靠眼底血管造影及遗传学筛查，早期筛查对该病的治疗及预后具有重要意义。疾病初期激光治疗可控制其进展；疾病晚期视网膜脱离可进行巩膜扣带术及玻璃体切割术，但预后差；抗血管内皮生长因子对新生血管的抑制作用在治疗中可发挥一定作用。随着对致病基因的进一步鉴定和致病机制的深入研究，针对视网膜血管疾病致病基因的选择性靶向治疗会成为某些临床表型患者的治疗新方向。

为了更好地筛查和研究视网膜血管疾病，以及筛选出有效的靶向治疗药物，本领域需要鉴定出更多新的视网膜血管疾病致病基因，以及需要模拟出视网膜血管疾病特征的动物模型。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种视网膜血管疾病模型的构建方法及其应用以解决上述技术问题。

本发明是这样实现的：

本发明提供了一种视网膜血管疾病动物模型的构建方法，其包括如下步骤：通过基因工程技术使得目标动物的Lmbr1l基因不表达或表达受到抑制。

发明人首次发现，通过基因工程技术抑制Lmbr1ll基因的表达或使Lmbr1ll基因不表达，可使动物体表现出视网膜血管生成缺陷的表型。包括不限于：浅层血管血管发育滞缓、血管密度降低、视网膜血管向深层发育滞缓，进一步导致玻璃体血管退化延迟。

由此，本发明可以构建出具有视网膜血管生成缺陷表型的视网膜血管疾病动物模型，为本领域研究人员深入研究视网膜血管疾病的发病机制，临床早期筛查以及筛选出可有效靶向治疗药物提供了模型基础。

上述表达受到抑制是指：Lmbr1l基因的表达水平相较于(基因敲除前的)正常水平略有下降或明显下降。包括不限于Lmbr1l基因的mRNA水平和/或蛋白水平相较于(基因敲除前的)正常水平略有下降或明显下降。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述构建方法包括：通过基因工程技术使得目标动物的Lmbr1l基因的第2外显子到第15外显子序列不表达或表达受到抑制。

Lmbr1l基因的全长cDNA可以从NCBI等数据库中获得。需要说明的是，本发明揭示了使得Lmbr1ll基因在目标动物中不表达或表达受到抑制可以导致视网膜血管生成缺陷的基础上，本领域的技术人员采用任何的基因操作技术使得Lmbr1ll基因在目标动物中不表达或表达受到抑制(即不发挥正常的功能)均在本发明的保护范围之内。