[发明专利]结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药突变检测方法及检测试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药突变的PCR引物对组，其特征在于，所述PCR引物对组包括：

第一引物对，所述第一引物对包括如SEQ ID NO.:1所示的正向引物；和，如SEQ IDNO.:4所示的反向引物；和/或

第二引物对，所述第二引物对包括如SEQ ID NO.:2所示的正向引物；和，如SEQ IDNO.:5所示的反向引物；和/或

第三引物对，所述第三引物对包括如SEQ ID NO.:3所示的正向引物；和，如SEQ IDNO.:6所示的反向引物。

2.一种用于检测结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药突变的引物探针混合液，其特征在于，所述引物探针混合液包括如权利要求1所述的PCR引物对组和选自下组的一个或多个探针：

第一探针，特异性靶向吡嗪酰胺耐药基因pncA的第-7和/或第-11位突变位点；

第二探针，特异性靶向吡嗪酰胺耐药基因pncA的第29和/或第34位突变位点；

第三探针，特异性靶向吡嗪酰胺耐药基因pncA的第137和/或第139位突变位点；

第四探针，特异性靶向吡嗪酰胺耐药基因pncA的第202、第203和/或第208位突变位点；

第五探针，特异性靶向吡嗪酰胺耐药基因pncA的第254位突变位点；和

第六探针，特异性靶向吡嗪酰胺耐药基因pncA的第281位突变位点。

3.根据权利要求2所述的引物探针混合液，其特征在于，所述第一探针如SEQ ID NO：7所示；和/或

所述第二探针如SEQ ID NO：8所示；和/或

所述第三探针如SEQ ID NO：9所示；和/或

所述第四探针如SEQ ID NO：10所示；和/或

所述第五探针如SEQ ID NO：11所示；和/或

所述第六探针如SEQ ID NO：12所示。

4.根据权利要求2所述的引物探针混合液，其特征在于，所述第一探针和所述第四探针具有第一荧光标记；

所述第二探针和所述第五探针具有第二荧光标记；

所述第三探针和所述第六探针具有第三荧光标记；

且，所述第一荧光标记、所述第二荧光标记和所述第三荧光标记互不相同。

5.根据权利要求4所述的引物探针混合液，其特征在于，所述第一荧光标记、所述第二荧光标记和所述第三荧光标记分别独立地选自Texas Red、CY5和VIC。

6.根据权利要求4所述的引物探针混合液，其特征在于，SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：10核苷酸序列的5’端标记有Texas Red，3’端标记有BHQ2；和/或

SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：11探针的核苷酸序列的5’端标记有CY5，3’端标记有BHQ2；和/或

SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：12探针的核苷酸序列的5’端标记有VIC，3’端标记有BHQ1。

7.根据权利要求2-6中任一项所述的引物探针混合液，其特征在于，所述引物探针混合液包括第一引物探针混合体系和第二引物探针混合体系，所述第一引物探针混合体系包括：

所述第一引物对、所述第一探针和所述第二探针；和/或

所述第三引物对和所述第六探针；

所述第二引物探针混合体系包括：

所述第二引物对、所述第三探针和所述第四探针；和/或

所述第三引物对和所述第五探针。

8.一种检测结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1所述的PCR引物对组。

9.一种检测结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括第一容器，所述第一容器包含如权利要求2至6中任一项所述的引物探针混合液。