[发明专利]基于电化学信号底物放大检测核酸的方法及试剂盒

权利要求书

1.基于电化学信号底物放大检测核酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)在传感电极上修饰特异识别待测核酸的核酸探针；

2)将待测核酸片段通过微流控通道送至传感电极处，与传感电极上的核酸探针1互补配对结合；通入清洗溶液洗清洗，留下配对物质；然后与电化学酶标的核酸探针2结合，通入清洗溶液洗清洗；通入底液，使标记的电化学活性酶催化底物转化为电化学活性物质，用电化学方法进行检测；电化学信号可通过调高底液浓度或增长反应时间放大；

或者，首先将待测核酸片段用电化学酶标记，然后通过微流控通道送至传感电极处，与传感电极上的核酸探针1互补配对结合；通入清洗溶液洗清洗掉未配对物质与未反应的酶标，仅留下配对物质；通入底液，使标记的电化学活性酶催化底物转化为电化学活性物质，用电化学方法进行检测；电化学信号可通过调高底液浓度或增长反应时间放大。

2.根据权利要求1所述基于电化学信号底物放大检测核酸的方法，其特征在于：传感监测的灵敏度和最低检测限可由调节底物浓度或/和电化学反应时间实现调控。

3.根据权利要求1所述基于电化学信号底物放大检测核酸的方法，其特征在于：所述电化学酶为碱性磷酸酶；所述底物为含氨基苯基磷酸酯的PBS或含氨基苯基磷酸酯的碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液。

4.根据权利要求1所述基于电化学信号底物放大检测核酸的方法，其特征在于：所述传感电极的材料为但不限于金属、金属氧化物、金属碳化物、导电塑料、导电聚合物、碳材料或其组合物或混合物。

5.根据权利要求1所述基于电化学信号底物放大检测核酸的方法，其特征在于：所述核酸探针为但不限于检测癌症、慢性病或病原微生物的核酸序列。

6.根据权利要求1所述基于电化学信号底物放大检测核酸的方法，其特征在于：所述生物素化的电化学酶需要通过生物素和链酶亲和素之间的亲和作用结合到将电化学酶结合核酸捕获探针2上。

7.根据权利要求1所述基于电化学信号底物放大检测核酸的方法，其特征在于：所述传感电极设置为能够同时检测至少一个待测核酸的微流控阵列芯片。

8.根据权利要求6所述基于电化学信号底物放大检测核酸的方法，其特征在于：所述微流控阵列芯片外接进样系统，并通过控制系统控制样品进样、信号采集、数据传输和数据处理。

9.根据权利要求1所述基于电化学信号底物放大检测核酸的方法，其特征在于：所述检测后还包括底物回收步骤，具体是将反应液中的反应产物分离，然后由反向电极还原生成电化学活性产物回收后循环利用。

10.根据权利要求1所述基于电化学信号底物放大检测核酸的方法，其特征在于：所述杂交的条件为将待测核酸样品配制于PBS中，室温下进行杂交反应。

11.根据权利要求1所述基于电化学信号底物放大检测核酸的方法，其特征在于：所述待测核酸样品为DNA或RNA。

12.基于电化学信号底物放大检测核酸的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括核酸探针修饰传感电极、PBS清洗液、链酶亲和素化的核酸捕获探针2、生物素化电化学酶和底物；所述电化学酶为碱性磷酸酶；所述底物为含氨基苯基磷酸酯的PBS或含氨基苯基磷酸酯的碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液

所述核酸探针和核酸捕获探针2分别与待测核酸不同区域互补。