[发明专利]一种原发性肝癌的分子标记物的检测试剂及其应用

权利要求书

1.用于检测原发性肝癌的分子标记物甲基化水平的核酸组合在制备原发性肝癌检测产品中的应用，其特征在于，所述分子标记物为位于如下至少一种CpG岛区域内至少包含一个CpG位点的核酸分子：区域1、区域2、区域3、区域4和区域5；

其中，所述区域1选自Chr2: 38960272-38960352正链，所述区域2选自Chr2:38960318-38960424正链，所述区域3选自Chr2: 38960430-38960591正链，所述区域4选自Chr2: 38960596-38960407负链，所述区域5选自Chr2: 38960422-38960267负链；

所述核酸组合选自如下核酸组合中的至少一种：用于检测所述区域1的核酸组合1、用于检测所述区域2的核酸组合2、用于检测所述区域3的核酸组合3、用于检测所述区域4的核酸组合4和用于检测所述区域5的核酸组合5；

所述核酸组合1包括引物组合1，所述核酸组合2包括引物组合2，所述核酸组合3包括引物组合3，所述核酸组合4包括引物组合4，所述核酸组合5包括引物组合5；

所述引物组合1的碱基序列如SEQ ID NO.7-8所示，所述引物组合2的碱基序列如SEQID NO.10-11所示，所述引物组合3的碱基序列如SEQ ID NO.13-14所示，所述引物组合4的碱基序列如SEQ ID NO.16-17所示，所述引物组合5的碱基序列如SEQ ID NO.19-20所示；

所述核酸组合1还包括探针1，所述核酸组合2还包括探针2，所述核酸组合3还包括探针3，所述核酸组合4还包括探针4，所述核酸组合5还包括探针5；

所述探针1的碱基序列如SEQ ID NO.9所示，所述探针2的碱基序列如SEQ ID NO.12所示，所述探针3的碱基序列如SEQ ID NO.15所示，所述探针4的碱基序列如SEQ ID NO.18所示，所述探针5的碱基序列如SEQ ID NO.21所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述原发性肝癌检测产品选自如下产品中的至少一种：试剂、试剂盒、芯片和测序文库。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述甲基化水平通过如下至少一种的方法进行检测：甲基化特异性PCR法、测序法、甲基化特异性高效液相层析法、数字PCR法、甲基化特异性高分辨率溶解曲线法、甲基化特异性微阵列法、甲基化敏感性限制性内切酶法和flap endonuclease 法。

4.一种试剂，其特征在于，其包括如下至少一种的核酸组合：核酸组合1、核酸组合2、核酸组合3、核酸组合4和核酸组合5；

所述核酸组合1包括引物组合1，所述核酸组合2包括引物组合2，所述核酸组合3包括引物组合3，所述核酸组合4包括引物组合4，所述核酸组合5包括引物组合5；

所述引物组合1的碱基序列如SEQ ID NO.7-8所示，所述引物组合2的碱基序列如SEQID NO.10-11所示，所述引物组合3的碱基序列如SEQ ID NO.13-14所示，所述引物组合4的碱基序列如SEQ ID NO.16-17所示，所述引物组合5的碱基序列如SEQ ID NO.19-20所示；

所述核酸组合1还包括探针1，所述核酸组合2还包括探针2，所述核酸组合3还包括探针3，所述核酸组合4还包括探针4，所述核酸组合5还包括探针5；

所述探针1的碱基序列如SEQ ID NO.9所示，所述探针2的碱基序列如SEQ ID NO.12所示，所述探针3的碱基序列如SEQ ID NO.15所示，所述探针4的碱基序列如SEQ ID NO.18所示，所述探针5的碱基序列如SEQ ID NO.21所示。

5.一种试剂盒，其特征在于，其包括权利要求4所述的试剂。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照、阴性对照、内参基因的检测引物、内参基因的检测探针、DNA聚合酶和缓冲液。