[发明专利]一种MPL三乙胺盐、其制备工艺及应用

说明书

本发明涉及一种MPL三乙胺盐、其制备工艺及应用。所述MPL三乙胺盐的制备方法包括如下步骤：(1)MPL粗品溶于氯仿后去除溶剂；(2)加入TEA水溶液，常温下超声使MPL均匀混悬在溶液中；(3)将上述溶液转移至纯水中，超声分散均匀；(4)向上述体系中加入TEA水溶液，超声，冻干即得。本发明还涉及所述的MPL三乙胺盐在制备疫苗佐剂及疫苗中的应用。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体的，涉及一种MPL三乙胺盐、其制备工艺及应用。

背景技术

MPL(单磷酰酯A，monophosphoryl lipid A，也简称MPLA)是来自于革兰氏阴性细菌细胞壁中的内毒素(LPS)的最内层脂质体(lipid A)部分。脂肪链结构和磷酸化程度均会影响其活性和内毒素的作用，来自于Salmonella minnesota的lipid A分别在1位和4位含有一个磷酸基团，会过度激活先天性免疫应答，从而导致败血性休克等临床症状，副反应强烈。文献报道去掉1位磷酸基团后，其毒性降低且保留了免疫活性，称之为单磷酰酯A(MPL)。

作为已上市的新一代疫苗佐剂，MPL临床用途广泛，常见的佐剂系统有：AS01(包含QS21与MPL(脂质体佐剂)、AS02(含有角鲨烯和α-生育酚的水包油乳液中加入MPL和QS21)、AS04(MPL吸附在氢氧化铝)、AS15(MPLA，QS21，CpG，脂质体)等，而佐剂系统不同的配伍(formulation)会影响到佐剂的免疫应答效果和副作用。已上市的含佐剂的疫苗产品：

Fendrix TM：由GSK在2004年研制的乙肝疫苗，该疫苗由乙肝病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)和AS04佐剂系统组成。

Cervarix TM与Gardasil TM：前者是由GSK在2009年研制的宫颈癌二价疫苗，由HPV L1表位的病毒样颗粒(VLP)与AS04系统组成；后者由默克研发，也含有AS04佐剂。

Shingrix TM：由GSK研制的带状疱疹疫苗，使用AS01佐剂系统。

由于佐剂系统不同的配伍(formulation)会影响到佐剂的免疫应答效果和副作用，所以MPL需要经过不同类型的制剂工艺后，形成佐剂制剂才能进行使用，因此对于该产品的溶解性质有较高的要求。

目前MPL来源主要依靠生物发酵提取，包含四个或五个不同链长的长链酰基结构同系物的复杂混合物。缺点是制备纯化难度大，残留的蛋白及糖异质带来的纯度问题，并且成本较高。例如，一类称为SJ-19a的lipid A是从革兰氏阴性细菌液化曲霉中酸性水解而来的，但在酸水解步骤中，可能发生化学降解，不稳定的磷酸键断开从而导致MPL的异质性。

合成制备的MPL结构明确，没有糖异质带来的纯度问题，更适于工业化生产，但是其水溶解度差，应用于制剂受限。现有报道的MPL，base(非盐型)和铵盐形式溶解度都比较差，用于液体制剂受限；在水中为混悬液，无法进行过滤除菌。

针对现有技术中的上述技术问题，提出本发明。

发明内容

本发明首先涉及一种MPL三乙胺盐(MPL-TEA)的制备方法，所述方法包括如下步骤：

(1)MPL粗品溶于氯仿后去除溶剂；

(2)加入TEA水溶液，常温下超声使MPL均匀混悬在溶液中；

(3)将上述溶液转移至纯水中，超声分散均匀；

(4)向上述体系中加入TEA水溶液，超声，冻干即得。

具体的，所述的方法的步骤为：

(1)MPL粗品与氯仿(10％，wt)中完全溶解，0.45μm微孔滤膜过滤后去除溶剂，使其均匀分布在圆底烧瓶底部；优选的，去除溶剂使用减压旋蒸法；