[发明专利]一种基于适配体结合crispr-cas12f1检测金黄色葡萄球菌的方法

权利要求书

1.一种核酸适配体结合cas12f1酶检测金黄色葡萄球菌(S.aureus)的方法，其特征在于：核酸适配体单链DNA（Aptamer，45 nt）与靶单链DNA（Blocker，21 nt）杂交形成双寡核酸链，加入金黄色葡萄球菌后，适配体核酸链与病原微生物结合并解离出靶单链DNA，最终靶单链DNA为Cas12f1蛋白的激活底物并引发反式切割单链DNA探针，通过探针荧光信号强度的变化进而获得高特异性与高灵敏度的检测。

2.按权利要求1所述的一种cas12f1检测金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于：核酸适配体Aptamer设计，其序列为TCCCACGATCTCATTAGTCTGTGGATAAGCGTGGGACGTCTATGA。

3.按权利要求1所述的一种cas12f1检测金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于：Blocker设计，其序列为CAGACTAATGAGATCGTGGGA。

4.按权利要求1所述的一种cas12f1检测金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，包括下列步骤：

(1) Aptamer与Blocker加入到杂交缓冲液（50 mM HEPES (pH7.4), 500 mM NaCl,0.05% t吐温 20）中，95℃加热15min，冷却至室温；

(2)将待测菌液加入Aptamer与Blocker的杂交溶液中，室温反应3h；反应结束后12000rpm/min离心2min；取上清加入到Cas12f1荧光检测体系中，37℃下反应2h，激发波长为492nm，发射波长为520nm条件下，测定上述体系荧光强度；其中，Aptamer，Blocker序列杂交缓冲液和Cas12f1如权利要求1-3任一项所述。

5.按权利要求1所述的一种cas12f1检测金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于：病原微生物，包括伤寒沙门菌(E.typhi)，肺炎克雷伯菌(K.pneumonia)，铜绿假单胞菌(K.pneumonia)，金黄色葡萄球菌(S.aureus)，单增李斯特(L.monocytogenes)和酿脓链球菌(S.pyogenes)。