[发明专利]一种基于适配体结合crispr-cas12f1检测金黄色葡萄球菌的方法

说明书

一种基于适配体结合crispr‑cas12f1检测金黄色葡萄球菌的方法本发明是基于核酸适配体单链DNA（45 nt）与靶单链DNA（21 nt）杂交形成双链寡核苷酸链，加入病原微生物后，双链寡核苷酸链释放出靶单链DNA技术，该靶单链DNA激活CRISPR‑Cas12f1酶并引发反式切割能力而开发的一种方法，具体涉及病原微生物的快速诊断领域，本方法操作简单、无核酸提取及核酸扩增，解决了实际现场检测的问题，丰富了crispr‑cas12f系统在检测领域的应用。

技术领域

本法发明设计一种基于核酸适配体结合crispr-cas12f1系统检测金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于：检测病原微生物具有较好特异性并且具有较强的抗干扰能力，具体涉及病原微生物的快速诊断领域，本方法操作简单、无核酸提取及核酸扩增，解决了实际现场检测的问题，丰富了crispr-cas12f系统在检测领域的应用。

背景技术

金黄色葡萄球菌是一种常见的食源性病原体，广泛存在于自然环境中，金黄色葡萄球菌可在适当的条件下产生肠毒素并引起食物中毒；近几十年来，金黄色葡萄球菌引起的食物中毒源源不断；因此，早期诊断金黄色葡萄球菌是非常重要(Jones, K.E., Patel,N.G., Levy, M.A., Storeygard, A., Balk, D., Gittleman, J.L., Daszak, P.,2008. Global trends in emerging infectious diseases. Nature 451(7181), 990-993.)。目前，金黄色葡萄球菌的检测方法主要集中在传统的培养方法、免疫学检测方法和分子生物学检测方法上。如酶联免疫吸附试验(ELISA)(Gilligan, K., Shipley, M.,Stiles, B., Hadfield, T.L., Sofi Ibrahim, M., 2000. Identification ofStaphylococcus aureus enterotoxins A and B genes by PCR-ELISA. Molecular andCellular Probes 14(2), 71-78.)，聚合酶链反应(PCR)(Nagaraj, S., Ramlal, S.,Kingston, J., Batra, H.V., 2018. Thermostabilization of indigenous multiplexpolymerase chain reaction reagents for detection of enterotoxigenicStaphylococcus aureus. J. Microbiol. Immunol. Infect. 51(2), 191-198.)，环介导的等温扩增(Choopara, I., Suea-Ngam, A., Teethaisong, Y., Howes, P.D.,Schmelcher, M., Leelahavanichkul, A., Thunyaharn, S., Wongsawaeng, D.,deMello, A.J., Dean, D., Somboonna, N., 2021. Fluorometric Paper-Based, Loop-Mediated Isothermal Amplification Devices for Quantitative Point-of-CareDetection of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA). ACS Sensors6(3), 742-751.)，核酸探针杂交(Qi, X., Wang, Z., Lu, R., Liu, J., Li, Y., Chen,Y., 2021. One-step and DNA amplification-free detection of Listeriamonocytogenes in ham samples: Combining magnetic relaxation switching and DNAhybridization reaction. Food Chem. 338, 127837.)，滚环扩增(Li, Y., Wang, J.,Wang, S., Wang, J., 2020. Rolling circle amplification based colorimetricdetermination of Staphylococcus aureus. Microchimica Acta 187(2), 119.)，电化学生物传感器(Farooq, U., Ullah, M.W., Yang, Q., Aziz, A., Xu, J., Zhou, L.,Wang, S., 2020. High-density phage particles immobilization in surface-modified bacterial cellulose for ultra-sensitive and selectiveelectrochemical detection of Staphylococcus aureus. Biosensors andBioelectronics 157, 112163.)；然而，它们具有稳定性低、酶依赖性扩增或假阳性结果。因此，迫切需要开发一种操作简单、可重复性高、灵敏度高、特异性高的金黄色葡萄球菌检测的新平台。