[发明专利]一种手性四氢萘-2-醇化合物的生物催化制备方法

说明书

本发明公开一种手性四氢萘‑2‑醇化合物的生物催化制备方法，包括步骤：(a)在液态反应体系中，以5,7‑二氟‑2‑四氢萘酮为底物，在辅酶存在下，在羰基还原酶催化下，进行不对称还原反应，形成(R)‑5,7‑二氟‑1,2,3,4‑四氢萘‑2‑醇；(b)任选地从所述步骤(a)的反应后的反应体系中分离出(R)‑5,7‑二氟‑1,2,3,4‑四氢萘‑2‑醇。本发明还公开该方法的羰基还原酶及其编码基因、载体、生物工程菌。本发明的优点在于步骤短，条件温和，收率显著提高，产品光学纯度高。

技术领域

本发明属于医药技术领域，特别是涉及一种手性四氢萘-2-醇化合物的生物催化制备方法。

背景技术

盐酸内匹司他是一种有效的选择性多巴胺β-水解酶抑制剂。现有的技术中，内匹司他盐酸盐的合成难度大，成本高，究其主要原因在于手性中间体的获得难。

WO 2009/021055A1公开了内匹司他的化学合成方法。该方法包括，预先将(-)-1R,2S-N-甲基麻黄碱、氢化铝锂、2-乙胺基吡啶经两步操作依次混合反应，制备得黄绿色悬浮液；再将悬浮液冷却至-65℃，向其中逐滴加入原料5,7-二氟-2-四氢萘酮，待反应完成后经一系列后处理得到手性中间体(R)-5,7-二氟-1,2,3,4-四氢萘-2-醇，收率47％，ee值93.4％。该方法的不足之处在于，预先前处理和后处理操作繁琐且条件严苛，不适合工业化生产，而且收率低，光学纯度偏低。

CN 111018663A公开了一种内匹司他中间体的制备方法，其在前述方法的基础上进行了改进，达到了提高产品的光学纯度的效果。该方法先将原料5,7-二氟-2-四氢萘酮还原生成消旋的5,7-二氟-1.2,3,4-四氢萘-2-醇(实施例收率96.3％)，再通过脂肪酶对消旋醇进行酯化后进行动力学拆分生成(R)-5,7-二氟-1,2,3,4-四氢萘-2-乙酯(实施例收率45％)，随后对其水解生成手性中间体(R)-5,7-二氟-1,2,3,4-四氢萘-2-醇(实施例收率91％，ee值99％)。该方法的不足之处在于，反应步骤多，动力学拆分理论收率仅为50％(实际收率45％)，无效异构体难以消旋，原料浪费严重，导致生产成本较高，不适合工业化生产。

因此，综合已有报道结合实际生产需要，本领域迫切需要开发出一种更具经济性的(R)-5,7-二氟-1,2,3,4-四氢萘-2-醇的制备方法，即能够同时满足以下条件：1)反应步骤短，操作简便；2)反应条件温和，易于工业化生产；3)产品收率能显著提高；4)产品光学纯度高。

发明内容

针对现有技术中，合成手性中间体(R)-5,7-二氟-1,2,3,4-四氢萘-2-醇的反应步骤多、操作繁琐、反应条件较严苛、收率低、和/或光学纯度偏低的不足，本发明提供了一种(R)-5,7-二氟-1,2,3,4-四氢萘-2-醇的生物催化制备方法，在温和的条件下，将原料5,7-二氟-2-四氢萘酮经一步还原反应直接得到(R)-5,7-二氟-1,2,3,4-四氢萘-2-醇，同时收率显著提高，产品光学纯度高，ee值能达99％。

第一方面，本发明提供了一种(R)-5,7-二氟-1,2,3,4-四氢萘-2-醇的生物催化制备方法，其包括以下步骤：

(a)在液态反应体系中，以式II化合物(5,7-二氟-2-四氢萘酮)为底物，在辅酶存在下，在羰基还原酶催化下，进行不对称还原反应，形成式I化合物，即(R)-5,7-二氟-1,2,3,4-四氢萘-2-醇；

(b)任选地从所述步骤(a)的反应后的反应体系中分离出式I化合物；

其中，所述羰基还原酶选自下组：

(i)来源于Leifsonia sp.strain S749的羰基还原酶LSADH，其氨基酸序列如SEQID NO:2所示；