[发明专利]纳米荧光标记微球、PGⅠ/PGⅡ单克隆抗体探针以及PGⅠ/PGⅡ检测试剂盒

权利要求书

1.一种纳米荧光标记微球，其特征在于，所述纳米荧光标记微球为由羧基修饰的铕铽配合物，所述纳米荧光标记微球的直径为0.2μm；

所述纳米荧光标记微球的制备方法包括如下步骤：

(一)稀土混合溶液的制备：将氧化铕与氧化铽按Eu³⁺与Tb³⁺的摩尔比为(20～500):1混合后，溶于质量浓度为0.5%的盐酸中，加热除去多余盐酸，在加热搅拌回流的条件下溶解于乙醇中，得到稀土混合溶液；

(二)配体A溶液的制备：在加热搅拌回流的条件下将配体A溶于乙醇中，得到配体A溶液；

其中，配体A为氟化物、复合氧化物、碳酸盐、钛酸盐、草酸盐和钒酸盐中的一种或多种；

配体A的摩尔数与步骤(一)中Eu³⁺与Tb³⁺总摩尔数的比值为1:(3～4)；

(三)表面功能化修饰：在不断搅拌的条件下将步骤(一)得到的稀土混合溶液和步骤(二)得到的配体A溶液混合，并在惰性气体保护氛围下加热至140～150℃，保温搅拌1～1.5h后，以3～5℃/min的升温速率升温至220～230℃，保温搅拌2～4h后，冷却至100～120℃，加入配体B，再次加热至220～230℃保温搅拌6～8h，自然冷却，在10000～20000rpm转速下离心8～10min，依次用乙醇和去离子水洗涤沉淀，再次重复离心和洗涤过程2～3次，真空干燥，即得；

其中，配体B为至少含有一个羧基的有机物；

配体B的摩尔数与步骤(一)中Eu³⁺与Tb³⁺总摩尔数的比值为1:(105～110)。

2.根据权利要求1所述的纳米荧光标记微球，其特征在于，步骤(一)中，氧化铕与氧化铽按Eu³⁺与Tb³⁺的摩尔比为100:1混合。

3.根据权利要求1所述的纳米荧光标记微球，其特征在于，步骤(二)中，配体A的摩尔数与步骤(一)中Eu³⁺与Tb³⁺总摩尔数的比值为1:4。

4.根据权利要求1所述的纳米荧光标记微球，其特征在于，步骤(三)中，配体B的摩尔数与步骤(一)中Eu³⁺与Tb³⁺总摩尔数的比值为1:108。

5.一种PGⅠ/PGⅡ单克隆抗体探针，其特征在于，由PGⅠ/PGⅡ单克隆抗体负载在权利要求1-4任一项所述的纳米荧光标记微球而得。

6.权利要求5所述PGⅠ/PGⅡ单克隆抗体探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1，将权利要求1-4任一项所述的纳米荧光标记微球与活化缓冲液混匀，离心获得微球沉淀a；

S2，用耦联缓冲液将微球沉淀a超声复悬，得到微球溶液a；

S3，向微球溶液a中加入NHS和EDC，混合反应0.8～1.2h后，离心获得微球沉淀b；

S4，用耦联缓冲液将微球沉淀b超声复悬，得到微球溶液b；

S5，向微球溶液b中加入PGⅠ/PGⅡ单克隆抗体，混匀反应2.8～3.2h，离心获得微球沉淀c；

S6，用封闭缓冲液将微球沉淀c超声复悬，即得。

7.根据权利要求6所述的PGⅠ/PGⅡ单克隆抗体探针的制备方法，其特征在于，步骤S3中，NHS的加入量为0.2～1mg/mL微球溶液a；EDC的加入量为0.04～0.2mg/mL微球溶液a。

8.根据权利要求6所述的PGⅠ/PGⅡ单克隆抗体探针的制备方法，其特征在于，步骤S5中，PGⅠ/PGⅡ单克隆抗体的加入量为1～5mg/mL微球溶液b。

9.一种PGⅠ/PGⅡ检测试剂盒，其特征在于，包括PGⅠ/PGⅡ检测试剂卡，所述PGⅠ/PGⅡ检测试剂卡包被有权利要求5所述的PGⅠ/PGⅡ单克隆抗体探针。

10.根据权利要求9所述的PGⅠ/PGⅡ检测试剂盒，其特征在于，检测PGⅠ抗原的灵敏度可达0.5ng/mL，线性范围0～500ng/mL，相关系数R²＞0.999，CV＜4.5%；检测PGⅡ抗原的灵敏度可达0.5ng/mL，线性范围0～500ng/mL，相关系数R²＞0.99，CV＜6.0%。