[发明专利]一株产D-阿洛酮糖3-差向异构酶的菌株及其应用

权利要求书

1.一种增强目的蛋白表达量的表达载体，其特征在于，所述表达载体为，将pP43NMK质粒上的P43启动子替换为hag、ylbP、hagP43、ylbPylbP、haghag中的任一个启动子得到的；

所述启动子hag、ylbP、hagP43、ylbPylbP、haghag的核苷酸序列分别为SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示。

2.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述目的蛋白为D-阿洛酮糖3-差向异构酶或磷酸化糖基差向异构酶；所述D-阿洛酮糖3-差向异构酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.20所示或如SEQ ID NO.21所示，所述磷酸化糖基差向异构酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.22所示或如SEQ ID NO.23所示。

3.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体为：将pP43NMK质粒上的P43启动子替换为核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的hag启动子，并且，将hag启动子序列上的碱基第129位～137位同时进行突变。

4.如权利要求3所述的表达载体，其特征在于，将hag启动子序列上的碱基第129位～137位同时进行突变为：gaggaggaa，或ggggaggag，或agggaggag，或agggagggg，或aaggaggag，或aaggagggg。

5.一种无抗表达载体，其特征在于，所述表达载体为：

将pP43NMK质粒上的P43启动子替换为核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的hag启动子，并且，将hag启动子序列上的碱基第129位～137位同时突变为：ggggaggag；并用核苷酸序列如SEQ ID NO.19的丙氨酸消旋酶基因dal代替pP43NMK质粒上的抗性基因卡那霉素Kan；

或，将pUB110质粒上的P43启动子替换为核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的hag启动子，并且，将hag启动子序列上的碱基第129位～137位同时突变为：ggggaggag；并用核苷酸序列如SEQ ID NO.19的丙氨酸消旋酶基因dal代替pUB110质粒上的抗性基因卡那霉素Kan和博来霉素Blm。

6.含有权利要求1～5任一所述的表达载体的重组细胞。

7.一种无抗食品级重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，将权利要求5所述的表达载体转入到敲除了丙氨酸消旋酶基因的枯草芽孢杆菌中，制备得到的。

8.如权利要求7所述的无抗食品级重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，以枯草芽孢杆菌1A751、WB600、WB800为表达宿主。

9.一种生产D-阿洛酮糖的方法，其特征在于，将权利要求6所述的重组细胞，或权利要求6所述的重组细胞的发酵液，或权利要求7或8所述的重组枯草芽孢杆菌，或权利要求7或8所述的重组枯草芽孢杆菌的发酵液，添加至含有果糖的反应体系中进行反应，得到反应液，从反应液中分离得到D-阿洛酮糖。

10.权利要求1～5任一所述的表达载体，或权利要求6所述的重组细胞，或权利要求7或8所述的重组枯草芽孢杆菌在制备D-阿洛酮糖或含有D-阿洛酮糖的产品中的应用。