[发明专利]一种标记蛋白的方法

权利要求书

1.一种蛋白标记的方法，其特征在于包括如下步骤：

1)选择需要标记的蛋白，使用带有羧基或者硫代羧基的功能分子作为底物，使用不饱和锍盐作为羧基活化剂，在碱性缓冲液下，标记的蛋白发生酰胺键的缩合反应；

2)在缓冲溶液中，经过不饱和锍盐活化的胺酯交换反应和蛋白上的氨基形成特异性修饰反应；

3)通过western blot或质谱手段鉴定特异性修饰情况。

2.根据权利要求1所述的一种蛋白标记的方法，其特征在于：所述的用于标记的蛋白为经过纯化的蛋白、或者加入了细胞裂解液的蛋白、或者为在细胞培养环境中的蛋白中任意一种。

3.根据权利要求1所述的一种蛋白标记的方法，其特征在于：所述的缓冲溶液为水、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、二氯甲烷、甲醇、乙腈或者二甲基亚砜中的任意一种。

4.根据权利要求1所述的一种蛋白标记的方法，其特征在于：所述的碱性缓冲溶液为硼酸-氢氧化钠缓冲溶液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液、三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液、碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液中的任意一种。

5.根据权利要求1所述的一种蛋白标记的方法，其特征在于：所述的不饱和锍盐为α,β-或者β,γ-不饱和取代锍盐。

6.根据权利要求1所述的一种蛋白标记的方法，其特征在于：所述的带有羧基或者硫代羧基的功能分子为羧酸或者硫代羧酸。

7.根据权利要求1所述的一种蛋白标记的方法，其特征在于：所述的不饱和锍盐活化剂选自乙烯基锍盐、乙炔基锍盐、丙炔基锍盐或者乙腈基锍盐及其衍生物中的任意一种，所述的锍盐的阴离子选自溴离子、碘离子、三氟甲磺酸根离子或者四氟硼酸根离子中的任意一种。

8.根据权利要求1所述的一种蛋白标记的方法，其特征在于：所述的用于标记的蛋白可为带有赖氨酸残基或N端裸露的任意蛋白。