[发明专利]检测CAR-T细胞CAR阳性表达率的荧光融合蛋白及其应用在审
| 申请号： | 202111464981.1 | 申请日： | 2021-12-03 |
| 公开（公告）号： | CN114380904A | 公开（公告）日： | 2022-04-22 |
| 发明（设计）人： | 赵礼军;毛文超;李静静 | 申请（专利权）人： | 河南省华隆生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/705 | 分类号： | C07K14/705;C07K14/435;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;G01N33/68;G01N15/14 |
| 代理公司： | 洛阳公信联创知识产权代理有限公司 41190 | 代理人： | 李真真 |
| 地址： | 453000 河南省新*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 car 细胞 阳性 表达 荧光 融合 蛋白 及其 应用 | ||
1.CD19胞外结构域在用于CAR-T细胞CAR阳性表达率检测的融合蛋白构建方面的应用，所述CD19胞外结构域的氨基酸序列如SEQ NO：05或SEQ NO：06所示。
2.绿色荧光蛋白GFP在用于CAR-T细胞CAR阳性表达率检测的融合蛋白构建方面的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：将CD19胞外结构域与GFP通过GSGSGS连接构建融合蛋白，所述CD19胞外结构域的氨基酸序列如SEQ NO：05或SEQ NO：06所示。
4.利用GFP标记CD19检测CAR-T细胞CAR阳性表达率的荧光融合蛋白，其特征在于：所述荧光融合蛋白是将CD19胞外结构域与荧光蛋白GFP融合所得；所述荧光融合蛋白的氨基酸序列如SEQ NO：01或SEQ NO：03所示。
5.编码如权利要求4所述融合蛋白的基因，其特征在于：编码如SEQ NO：01所示蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ NO：02所示；编码如SEQ NO：03所示蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ NO：04所示。
6.包含编码如权利要求4所述融合蛋白的核苷酸序列的病毒载体。
7.根据权利要求6所述的病毒载体，其特征在于：所述病毒载体为慢病毒、腺病毒或逆转录病毒。
8.如权利要求6所述的病毒载体用于原核真核细胞转染后生成的细胞系。
9.如权利要求4所述的融合蛋白、如权利要求5所述的基因、如权利要求6所述的病毒载体或如权利要求8所述的细胞系在CAR-T细胞的CAR阳性表达率检测方面的应用。
10.CAR-T细胞CAR阳性表达率的检测方法，其特征在于：将如权利要求4所述融合蛋白基因经过慢病毒转染于SupB-1细胞中，用转染后的SupB-1细胞培养上清液与生产的CAR-T细胞外的anti-CD19-scFv区进行结合，利用流式细胞仪进行488通道检测，从而实现对CAR-T细胞CAR阳性表达率的检测。
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