[发明专利]用于检测猫疱疹病毒I型的LAMP引物组、荧光可视化快速检测试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于检测猫疱疹病毒I型的LAMP引物组，其特征在于，其包括一对特异性外引物F3和B3，一对特异性内引物FIP和BIP及一对环引物LF和LB，其中，所述F3和B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述FIP和BIP的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQID NO.4所示，所述LF和LB的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

2.权利要求1所述的引物组在制备检测猫疱疹病毒I型的LAMP试剂盒中的应用。

3.一种用于检测猫疱疹病毒I型的LAMP试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1所述的引物组。

4.一种用于检测猫疱疹病毒I型的荧光可视化快速试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1所述的引物组、2×LAMP反应缓冲液、酶溶液和荧光目视检测试剂。

5.如权利要求4所述的荧光可视化快速试剂盒，其特征在于，2×LAMP反应缓冲液含有：10×Thermopol buffer、MgSO₄、甜菜碱溶液、dNTPs；酶溶液为8.0 U/μL的Bst DNA聚合酶溶液；荧光目视检测剂中按终浓度计含有6mmol/L MnCl₂和0.4mmol/L的钙黄绿素溶液。

6.如权利要求4所述的荧光可视化快速试剂盒，其特征在于，还包括阴性对照和阳性对照，所述阳性对照为含有猫疱疹病毒I型目的基因的重组质粒pUC57-A，所述目的基因的序列如SEQ ID NO.7所示，阴性对照为无DNA酶蒸馏水。

7.一种非疾病诊断用途的用于检测猫疱疹病毒I型的荧光可视化快速检测方法，其特征在于，其包括如下步骤：

（1）从样品中提取DNA；

（2）对步骤（1）提取的所述DNA进行等温扩增；其中，在扩增的反应体系中，采用如权利要求1所述的引物组，置于61~67℃进行恒温扩增反应；

（3）结果判定：60分钟内扩增产物呈现绿色为阳性，60分钟内扩增产物呈现橘黄色为阴性。

8.如权利要求7所述的快速检测方法，其特征在于，在步骤（1）中，从样品中提取DNA采用病毒DNA/RNA纯化试剂盒进行提取获得检测样品的DNA。

9.如权利要求7所述的快速检测方法，其特征在于，在步骤（2）中，反应体系为25μL，其中含有21μL的LAMP预混液：2×LAMP反应缓冲液12.5μL、5 umol/L的外引物F3 和B3 各1μL、40 umol/L的内引物FIP和BIP各 1μL、20 umol/L的环引物LF 和LB各1μL，无DNA酶的蒸馏水2.5μL；

1μL的8.0 U/μL的Bst DNA聚合酶溶液；

1μL的荧光目视检测试剂；

2μL的样品DNA溶液；

扩增条件为63℃，60分钟。