[发明专利]一种多能干细胞体外形成3D球的培养方法

权利要求书

1.一种多能干细胞体外形成3D球的培养方法，其特征在于，包括：

步骤1，将多能干细胞在干细胞培养基中进行培养；

步骤2，细胞生长后，加入消化液进行消化；

步骤3，消化结束后，移除消化液，加入成球培养基，使细胞从培养器皿的表面脱落，但仍然保持细胞团块状态，此时形成细胞悬液；

步骤4，将细胞悬液转移至培养皿中继续培养；

其中，所述成球培养基成分组成为：干细胞培养基；人神经调节蛋白-1，5ng/mL～10ng/mL；青霉素-链霉素，50U/mL～100U/mL。

2.根据权利要求1所述的多能干细胞体外形成3D球的培养方法，其特征在于，所述干细胞培养基包括重组人碱性成纤维细胞生长因子和重组人转化生长因子β。

3.根据权利要求1所述的多能干细胞体外形成3D球的培养方法，其特征在于，步骤2中所述的消化，具体时间为3.5min～4min。

4.根据权利要求3所述的多能干细胞体外形成3D球的培养方法，其特征在于，所述的消化时间为3.5min～3.75min。

5.根据权利要求1所述的多能干细胞体外形成3D球的培养方法，其特征在于，步骤3中所述的使细胞从培养皿表面脱落，具体为用电动助吸器或手动助吸器中的任一种吹打细胞，吹打力度为2mL/s～5mL/s。

6.根据权利要求5所述的多能干细胞体外形成3D球的培养方法，其特征在于，所述的吹打力度为2mL/s～2.5mL/s。

7.根据权利要求1所述的多能干细胞体外形成3D球的培养方法，其特征在于，步骤2中所述的细胞生长，密度达到60％～90％后进行消化。

8.根据权利要求7所述的多能干细胞体外形成3D球的培养方法，其特征在于，所述的细胞生长，密度达到70％～80％后进行消化。

9.根据权利要求1所述的多能干细胞体外形成3D球的培养方法，其特征在于，步骤2中所述的消化液为蛋白水解酶-胶原酶复合液，乙二胺四乙酸或中性蛋白酶中的至少一种。

10.根据权利要求9所述的多能干细胞体外形成3D球的培养方法，其特征在于，所述的消化液为蛋白水解酶-胶原酶复合液。