[发明专利]一种采用高效液相色谱法测定硼替佐米中蒎烷二醇含量的方法

说明书

本发明提供一种采用高效液相色谱法测定硼替佐米中蒎烷二醇含量的方法，方法中色谱条件包括以十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，以体积比为70：30～85：15的乙腈‑0.1％磷酸水为流动相，流速为0.8～1.2ml/min，检测波长为265～275nm，进样量为5～100μl，采用以硼替佐米为衍生试剂的衍生化反应进行样品溶液制备。本申请以硼替佐米为衍生试剂，将蒎烷二醇制备为蒎烷二醇衍生物，通过对蒎烷二醇衍生物的测定，定量测定硼替佐米中蒎烷二醇含量，本方法的专属性强，精密度好，准确度高，可快速准确地测定蒎烷二醇的含量。

技术领域

本发明涉及医药检测技术领域，具体涉及一种采用高效液相色谱法测定硼替佐米中蒎烷二醇含量的方法。

背景技术

硼替佐米(BTZM)是一种人工合成的丙氨酸基硼酸衍生物，被应用于治疗多发性骨髓瘤，有临床数据表明，硼替佐米对于宫颈瘤、淋巴瘤、干细胞瘤等具有明显疗效，因此该药物逐渐成为重要的抗肿瘤药物，成为国内仿制药研究的热点。

近年来，对药物中的异构体要求越来越严格，不只是限度的要求，而是要求准确测定其含量。硼替佐米的合成路线的最后一步一般是脱去蒎烷二醇保护基，因此检测硼替佐米中残留蒎烷二醇成为硼替佐米质量控制的重要内容。具体地，蒎烷二醇存在两种构型(R型和S型)，此类化合物沸点高(S型沸点239.9℃)，顶空检测导致灵敏度较低；直接进样，供试品中的硼酸破坏色谱柱，不能重现方法；用三氟醋酸衍生，衍生物为3种不同化合物，且衍生比例不稳定；用GC难以达到检测要求。此类化合物无紫外吸收，无法使用UV检测器，蒸发光检测器和示差折光检测器对此类化合物相应较低，灵敏度不能达到检测要求，普通HPLC无法检测，文献中尚未发现硼替佐米中蒎烷二醇的检测方法，即目前对于硼替佐米中蒎烷二醇的分析检测还是空白，因而如何快速准确地分离测定硼替佐米中蒎烷二醇的含量，成为目前亟需解决的问题。

发明内容

针对现有技术存在的技术问题，本发明提供一种采用高效液相色谱法测定硼替佐米中蒎烷二醇含量的方法，该方法可以快速准确地分离测定硼替佐米中蒎烷二醇的含量，弥补了现在没有硼替佐米中蒎烷二醇分析方法检测的空白。

为了解决上述技术问题，本发明采用了如下的技术方案：

一种采用高效液相色谱法测定硼替佐米中蒎烷二醇含量的方法，所述方法中色谱条件包括以十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，以体积比为70：30～85：15的乙腈-0.1％磷酸水为流动相，流速为0.8～1.2ml/min，检测波长为265～275nm，进样量为5～100μl，采用以硼替佐米为衍生试剂的衍生化反应进行样品溶液制备，具体所述衍生化反应如下所示：

样品溶液的制备包括：

蒎烷二醇衍生物储备溶液：精密称取蒎烷二醇衍生物15mg，置于50ml量瓶中，加入乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀即得；

蒎烷二醇衍生物对照品溶液：精密量取蒎烷二醇衍生物储备溶液1ml，置于100ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀即得；

供试品溶液1：精密称定硼替佐米20mg，置于20ml量瓶中，用10ml乙腈溶解，用乙腈稀释至刻度，即得；

供试品溶液2：精密称定硼替佐米20mg，置于20ml量瓶中，用10ml乙腈溶解，在60℃水浴放置10min，取出放置室温，用乙腈稀释至刻度，即得；

采用外标法计算硼替佐米中蒎烷二醇含量：供试品蒎烷二醇含量％＝(供试品溶液2蒎烷二醇衍生物含量-供试品溶液1蒎烷二醇衍生物含量)÷3.05，其中3.05为蒎烷二醇衍生物与蒎烷二醇分子量之比。

优选的，所述色谱柱的柱温为25～40℃，柱填料粒径为3.5～5μm，柱长为150～250mm。

优选的，所述乙腈-0.1％磷酸水的体积比为80：20。