[发明专利]一种通用型单克隆抗体筛选的免疫层析检测试纸条及检测方法

说明书

本发明提供一种通用型单克隆抗体筛选的免疫层析检测试纸条及检测方法，所述免疫层析检测试纸条由试纸和抗原生物素探针两部分组成；所述试纸包括支撑底板、从测试端依次固定在支撑底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜及手柄端的吸水纸；所述硝酸纤维素膜层上依次设置有检测线和质控线；所述结合垫采用吸附有胶体金标记的羊抗鼠IgG的玻璃纤维棉制成；所述检测线喷涂有链霉亲和素；所述质控线喷涂有兔抗羊IgG；所述抗原生物素探针为靶标物半抗原与载体蛋白偶联后形成的靶标物人工抗原，靶标物人工抗原再与生物素偶联获得抗原生物素探针。可广泛应用于单克隆抗体制备过程中小鼠血清、细胞上清或腹水等样品中的靶标物特异性抗体的检测。

技术领域

本发明涉及一种通用型单克隆抗体筛选的免疫层析检测试纸条及检测方法，属于免疫学检测领域。

背景技术

免疫层析技术是一种以硝酸纤维素膜为载体，标记抗原或抗体作为示踪剂的一种层析检测技术。与传统的免疫分析方法相比，这项技术具有操作简单、快速、成本低、不需要熟练的技术人员或昂贵的设备等优点，已经广泛应用于医药、畜牧业、农业及食品安全等领域。

单克隆抗体具有纯度高、特异性强、效价高、少或无交叉反应等特性，已广泛应用于疾病的诊断、特异性抗原或蛋白的检测和鉴定、疾病的被动免疫治疗和生物导向制药的制备等。单克隆抗体在理论和实践上的应用，成为解决生物学、医学等诸多重大问题的重要手段。

但是单克隆抗体制备过程比较繁琐，特别是细胞融合过程中杂交瘤细胞的筛选。从融合开始，杂交瘤细胞需要经过4-5轮的筛选，现有技术多是通过ELISA方法检测其是否分泌特异性抗体，以及抗体的免疫学特性，工作量庞大，费时费力；而且通过ELISA方法筛选出来的抗体，灵敏度及亲和力参差不齐，能成功用于免疫层析试纸等快速检测产品的研发的概率较低。如果用免疫层析试纸进行单抗的筛选工作，则可以大大节省工作量，且筛选出的抗体灵敏度和亲和力更好，更适合免疫层析试纸等快速检测产品的研发。但筛选单克隆抗体有着多种多样的靶标，针对每个靶标建立一个免疫层析试纸进行筛选成本高不便于推广应用，因此急需一种通用的免疫层析试纸，来解决现在存在的问题。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种通用型单克隆抗体筛选的免疫层析检测试纸条及检测方法，可广泛应用于单克隆抗体制备过程中小鼠血清、细胞上清或腹水等样品中的靶标物特异性抗体的检测。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种通用型单克隆抗体筛选的免疫层析检测试纸条，由试纸和抗原生物素探针两部分组成；所述试纸包括支撑底板、从测试端依次固定在支撑底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜及手柄端的吸水纸；所述硝酸纤维素膜层上依次设置有检测线和质控线；所述结合垫采用吸附有胶体金标记的羊抗鼠IgG的玻璃纤维棉制成；所述检测线喷涂有链霉亲和素；所述质控线喷涂有兔抗羊IgG；所述抗原生物素探针为靶标物半抗原与载体蛋白偶联后形成的靶标物人工抗原，靶标物人工抗原再与生物素偶联获得抗原生物素探针。

所述载体蛋白为牛血清白蛋白或鸡卵清白蛋白或钥孔血蓝蛋白。

所述抗原生物素探针的制备方法为：

第一步，取3-6mg生物素加入0.1-0.5mL DMSO中充分溶解，得混合物1；

第二步，取3-6mg EDC加入0.5mL双蒸水中充分溶解，然后在室温搅拌下加入到混合物1的溶液中，反应30min，得混合物2；

第三步，将1-10mg靶标物人工抗原在搅拌状态下加入到混合物2的溶液中，室温反应2h后，PBS透析3d，获得抗原生物素探针。

所述的免疫层析检测试纸条的检测方法，包括以下步骤：

1)评价杂交瘤细胞分泌抗体效价