[发明专利]一种α-淀粉酶抑制剂活力的检测方法

权利要求书

1.一种α-淀粉酶抑制剂活力的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：选用麦芽糖制作标准曲线；

步骤2：选用酶解过程的生成物衡量抑制剂活力更为合理准确，麦芽糖与3,5-二硝基水杨酸(DNS)在高温下发生显色反应，颜色深浅(A540)与麦芽糖浓度存在对应关系；

步骤3：将淀粉酶活力值统一折算到100IU后再计算抑制剂活力值。

2.根据权利要求1所述的一种α-淀粉酶抑制剂活力的检测方法，其特征在于：步骤1具体包容如下步骤：

(1)取7只试管编号，分别加入麦芽糖标准溶液(1mg/mL)0，0.15，0.45，0.75，1.05，1.35，1.5mL，然后用去离子水将各试管中液体体积补足至1.5mL；

(2)向各试管中加入1mLDNS后，于沸水浴中加入10min后冷却；

(3)向各试管中加入10mL去离子水，振荡混匀后，于540nm波长下测定吸光度值，用去离子水调零。

3.根据权利要求1所述的一种α-淀粉酶抑制剂活力的检测方法，其特征在于：所述步骤2的具体流程为：

将粉末样品与磷酸盐缓冲液(PBS)按1:500(m/V，g/mL)的比例制成液体样品(需分散完全，不用离心)；将0.25mLα-淀粉酶液和0.25mL液体样品加入到0.5mLPBS中，于37℃水浴10min后，加入0.5mL可溶性淀粉溶液，精确反应5min后加入1mL3,5—二硝基水杨酸试剂(DNS)以终止反应；将反应液于沸水浴中加热10min后迅速置于冰水浴中冷却至室温，然后加入10mL去离子水，混合均匀后于540nm波长下测定吸光值；

其中，在测定过程中，设置空白管、空白对照管、抑制管和抑制对照管，空白管中不添加样品，空白对照管中不加α-淀粉酶液和样品，抑制对照管中不加α-淀粉酶液，体积不足处均以PBS补足。

4.根据权利要求1所述的一种α-淀粉酶抑制剂活力的检测方法，其特征在于：所述步骤3具体包括：

(1)设麦芽糖浓度标准曲线为：c＝f(A)。

其中，c-麦芽糖浓度，mg/mL；A-相应麦芽糖浓度下的吸光度值；

(2)空白组中α-淀粉酶活力(Φ)的计算公式如下：

Φ＝α-淀粉酶活力(IU)＝(f(A₁)-f(A₂))×1.5×1000/5

其中，1.5-酶解反应体系的体积，mL；5-酶解反应时间，min；

(3)样品中α-AI活力的计算公式如下：

α-AI活力(IU/g)＝(f(A₁)-f(A₂)-f(A₃)+f(A₄))×1.5×100×V×100/(5×0.25×m×Φ)

其中，A1-空白管吸光值；A2-空白对照管吸光值；A3-抑制管吸光值；A4-抑制对照管吸光值；V-制备液体样品时所用PBS的体积，mL；m-制备液体样品时所取粉末样品的质量，g；1.5-酶解反应体系的体积，mL；5-酶解反应时间，min；0.25-测定中所取液体样品的体积，mL；Φ-α-淀粉酶活力，IU。