[发明专利]鉴别无籽油棕的SSR标记引物、应用及方法

权利要求书

1.鉴别无籽油棕的SSR标记引物，其特征在于：包括两对引物组，分别为P16和P19；所述P16引物的正向引物的序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物的序列如SEQ ID NO.2所示，所述P19引物的正向引物的序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物的序列如SEQ ID NO.4所示。

2.根据权利要求1所述的鉴别无籽油棕的SSR标记引物在育苗阶段对油棕的无籽性状进行早期鉴定中的应用。

3.一种利用权利要求1所述的SSR标记引物鉴别无籽油棕的方法，其特征在于，步骤如下：

步骤S1，取0.05-0.1g油棕叶片提取基因组DNA，稀释浓度到200ng/µl；

步骤S2，配制20ul反应体系对DNA进行PCR扩增，扩增方式为梯度降落法，扩增条件为：94˚C变性5 min，94˚C变性30s，退火温度从65˚ 降到56˚C，运行10个循环，每个循环降低1 ˚C，55˚C退火25个循环，每个循环45 s，72˚C延伸1 min，最后72˚C 延伸10 min，之后4˚C保存；

步骤S3，PCR产物中加入1µl 6×染料混合，取0.8-1.0 µl混合液，在6%聚丙烯酰胺凝胶上点样，电泳后银染，观察250-500bp之间的条带情况进行无籽油棕鉴定：250-500bp之间有条带的为有籽油棕，没有条带的为无籽油棕；

步骤S2中，反应体系包含1µl 基因组DNA，0.4 µl dNTPs，2 µl含有MgCl₂的10×RealTimes buffer，2 µl RealTimes Taq DNA聚合酶 5 U µl^-1，0.8 µl正向引物 10 µM，0.8 µl反向引物10 µM，13 µl灭菌超纯水。