[发明专利]一种基于生物效应的心可舒片质量控制方法

权利要求书

1.一种基于生物效应的心可舒片质量控制方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)心可舒片样品甲醇提取物的制备；

(2)采用斑马鱼节间血管生成障碍模型对步骤(1)中心可舒片样品甲醇提取物进行生物效应检测，用药浓度以心可舒片样品浓度为85μg/ml为标准；采用斑马鱼高血脂症模型对步骤(1)中心可舒片样品甲醇提取物进行生物效应检测，用药浓度以心可舒片样品浓度为680μg/ml为标准；

(3)步骤(2)中心可舒片样品检测结果：斑马鱼节间血管生成障碍模型中斑马鱼节间血管长度达到2180μm以上，斑马鱼高血脂症模型中降脂率达到40％以上，同时达到所述两个指标数值时判定心可舒片样品为合格样品。

2.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1)中利用甲醇提取心可舒片样品提取物；

优选的，利用甲醇提取心可舒片样品提取物的制备方法，包括如下步骤：

取心可舒片样品，研磨成粉，称定，加入10倍量甲醇，常温浸泡30min，超声提取30min，固液分离，保留提取液，将剩余药渣再重复提取2次，保留提取液，然后合并提取液体浓缩至浸膏，将浸膏干燥制得心可舒样品提取物；

优选的，取心可舒片样品，研磨成粉，称定，加入10倍量甲醇，常温浸泡30min，超声提取30min，进行抽滤，保留提取液，将药渣重复提取2次，保留提取液，然后合并提取液，将提取液减压浓缩至1/10体积，转移至水浴蒸至浸膏，然后将浸膏真空干燥，制得心可舒片样品提取物。

3.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1)中将心可舒片样品提取物用体积分数10％二甲基亚砜配制含100mg/ml心可舒片样品提取物的储备液，用时根据心可舒片样品提取物的得率计算心可舒片样品浓度。

4.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(2)中使用Imagepro Plus 5.1测量节间血管。

5.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(2)中使用Imagepro Plus 5.1测量心可舒片处理组染色强度并计算降脂率，降脂率(％)＝(模型组IOD－心可舒片处理组IOD)/模型组IOD×100％；所述IOD为尾部区域血脂染色强度。

6.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(2)中采用斑马鱼节间血管生成障碍模型对步骤(1)中心可舒片样品提取物进行生物效应检测的方法，包括如下步骤：

①选用23hpf Tg(flk1:EGFP)血管绿色荧光标记转基因斑马鱼，用1mg/ml链蛋白酶E脱膜，将脱膜后的健康胚胎随机分为空白对照组，模型组，心可舒片处理组，将胚胎随机分配，各组设置2个以上平行，每个平行10-12枚胚胎；空白对照组给予：养鱼水中含体积分数为0.1％DMSO；模型组给予：养鱼水中含体积分数为0.1％DMSO+终浓度为0.175μg/ml的PTK787；心可舒片处理组给予：养鱼水中含体积分数为0.1％DMSO+终浓度为0.175μg/ml的PTK787+终浓度为85μg/ml的心可舒片；孵育温度28℃，孵育至47hpf时，在荧光显微镜下观察斑马鱼胚胎血管形态；

②定量分析：使用Imagepro Plus 5.1测量节间血管(ISV)。