[发明专利]一种负载帕瑞昔布、白介素-4和牛血清白蛋白用于骨关节炎治疗的双层微球及其制备方法

权利要求书

1.一种负载帕瑞昔布、白介素-4和牛血清白蛋白用于骨关节炎治疗的双层微球的制备方法，其特征在于，所述制备方法的步骤如下：

（1）取白介素-4溶于含模型蛋白牛血清白蛋白的PBS溶液作为内水相A；

（2）称取内层载体材料酯封端聚乳酸乙醇酸共聚物OH-PLGA75/25-COOR溶于二氯甲烷中，形成浓度100mg/mL的载体材料溶液作为油相A，配制质量浓度为1%的聚乙烯醇（PVA）作为外水相；

（3）将内水相A逐滴加入溶有载体材料的油相A中，经高速剪切机以8000rpm的速度剪切2min后，将形成的W1/O1型乳液，然后再将W1/O1型乳液逐滴加入质量浓度为1%的PVA中，经匀浆机以8000rpm的速度剪切2min，得到W1-O1-W2型复乳；

（4）将W1-O1-W2型复乳置于磁力搅拌器上挥发有机溶剂4h，以8000rpm的转速离心10min收集上清液，用双蒸水洗涤离心3次洗去多余PVA溶液，汇总洗涤液与上清液，下层沉淀即为单层微球；

（5）将离心后的单层微球用蒸馏水复溶后做内水相B，将外层载体材料端羟基聚乳酸乙醇酸共聚物50/50 OH-PLGA-OH50/50和帕瑞昔布溶于二氯甲烷中，形成浓度50mg/mL的载体材料溶液作为油相B；

（6）将内水相B逐滴加入溶有载体材料的油相B中，10000rpm的速度剪切2min后，将形成的W/O型乳液，然后再将W/O型乳液逐滴加入质量浓度为1%的PVA中，经匀浆机以10000rpm的速度剪切2min后得到W3-O2-W4型复乳；

（7）将W3-O2-W4型复乳置于磁力搅拌器上挥发有机溶剂4h，离心收集上清液，用双蒸水洗涤离心3次洗去多余PVA溶液，汇总所有洗涤液与上清液，离心后的下层沉淀即为双层微球，用蒸馏水重悬后加入冻干保护剂，然后冷冻干燥，得到干燥的双层微球；

所述步骤（3）中以1：5的体积比将内水相A逐滴加入溶有载体材料的油相A中；所述步骤（3）中将W1/O1型乳液以1：5的体积比逐滴加入质量浓度为1%的PVA中；所述步骤（6）中将内水相B以1：5的体积比逐滴加入溶有载体材料的油相B；所述步骤（6）中将W/O型乳液以1：10的体积比逐滴加入质量浓度为1%的PVA中。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中聚乳酸乙醇酸共聚物OH-PLGA75/25-COOR中LA:GA为75：25，分子量为75000。

3.通过如权利要求1或2所述制备方法获得的负载帕瑞昔布、白介素-4和牛血清白蛋白用于骨关节炎治疗的双层微球。